糞大腸菌的測定

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1、本電子版為發(fā)布稿。請(qǐng)以中國環(huán)境科學(xué)出版社出版的正式標(biāo)準(zhǔn)文本為準(zhǔn)。HJ中華人民共和國環(huán)境保護(hù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)HJ/T347─2007水質(zhì)糞大腸菌群的測定多管發(fā)酵法和濾膜法（試行）Waterquality—Determinationoffecalcoliform—manifoldzymotechnicsandfiltermembrane（發(fā)布稿）2007-03-10發(fā)布2007-05-01實(shí)施國家環(huán)境保護(hù)總局發(fā)布IHJ/T347—2007目次前言………………………………………………………………………………………

2、…………Ⅱ第一篇多管發(fā)酵法1適用范圍………………………………………………………………………………………12原理……………………………………………………………………………………………13培養(yǎng)基和試劑…………………………………………………………………………………14步驟……………………………………………………………………………………………25結(jié)果的計(jì)算……………………………………………………………………………………2第二篇濾膜法1適用范圍………………………………………………………………………………………

3、42原理……………………………………………………………………………………………43培養(yǎng)基和試劑…………………………………………………………………………………44步驟……………………………………………………………………………………………55結(jié)果的計(jì)算……………………………………………………………………………………6I前言為規(guī)劃《地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（GB3838-2002）的實(shí)施工作，制定本試行標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了地表水、地下水及廢水中糞大腸菌群的多管發(fā)酵法和濾膜法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于地表水、地下水及廢水中糞

4、大腸菌群的測定。本標(biāo)準(zhǔn)為首次制訂。本標(biāo)準(zhǔn)由國家環(huán)境保護(hù)總局科技標(biāo)準(zhǔn)司提出。本標(biāo)準(zhǔn)由國家環(huán)境保護(hù)總局水和廢水監(jiān)測分析方法編委會(huì)組織中國環(huán)境監(jiān)測總站等單位起草。本標(biāo)準(zhǔn)國家環(huán)境保護(hù)總局2007年3月10日批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)自2007年5月1日起實(shí)施。本標(biāo)準(zhǔn)由國家環(huán)境保護(hù)總局解釋。II水質(zhì)糞大腸菌群的測定糞大腸菌群是總大腸菌群中的一部分，主要來自糞便。在44.5℃溫度下能生長并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的大腸菌群稱為糞大腸菌群。用提高培養(yǎng)溫度的方法，造成不利于來自自然環(huán)境的大腸菌群生長的條件，使培養(yǎng)出來的菌主要為來自糞便中

5、的大腸菌群，從而更準(zhǔn)確地反映出水質(zhì)受糞便污染的情況。糞大腸菌群的測定可以用多管發(fā)酵法和濾膜法。第一篇多管發(fā)酵法1適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于地表水、地下水及廢水中糞大腸菌群的測定。2原理多管發(fā)酵法是以最可能數(shù)（mostprobablenumber）簡稱MPN來表示試驗(yàn)結(jié)果的。實(shí)際上它是根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)理論，估計(jì)水體中的大腸桿菌密度和衛(wèi)生質(zhì)量的一種方法。如果從理論上考慮，并且進(jìn)行大量的重復(fù)檢定，可以發(fā)現(xiàn)這種估計(jì)有大于實(shí)際數(shù)字的傾向。不過只要每一稀釋度試管重復(fù)數(shù)目增加，這種差異便會(huì)減少，對(duì)于細(xì)菌含量的估計(jì)值，大部分取

6、決于那些既顯示陽性又顯示陰性的稀釋度。因此在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)上，水樣檢驗(yàn)所要求重復(fù)的數(shù)目，要根據(jù)所要求數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度而定。3培養(yǎng)基和試劑本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑除另有注明外，均為符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純化學(xué)試劑；實(shí)驗(yàn)用水為新制備的去離子水。3.1單倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液：成分：蛋白胨10g牛肉浸膏3g乳糖5g氯化鈉5g1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL蒸餾水1000mL制法：將蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化鈉加熱溶解于1000mL蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH為7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混勻，分裝于含有倒置的小玻

7、璃管的試管中，于高壓蒸汽滅菌器中，在115℃滅菌20min，貯存于暗處備用。3.2三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液：按上述配方比例三倍（除蒸餾水外），配成三倍濃縮的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，制法同上。13.3EC培養(yǎng)液：成分：胰胨20g乳糖5g膽鹽三號(hào)1.5g磷酸氫二鉀（K2HPO4）4g磷酸二氫鉀（KH2PO4）1.5g氯化鈉5g蒸餾水1000mL制法：將上述成分加熱溶解，然后分裝于含有玻璃倒管的試管中。置高壓蒸汽滅菌器中，115℃滅菌20min。滅菌后pH應(yīng)為6.9。3.4培養(yǎng)基的存放在密封瓶中的脫水培養(yǎng)基成品要存

8、放在大氣濕度低、溫度低于30℃的暗處，存放時(shí)應(yīng)避免陽光直接照射，并且要避免雜菌侵入和液體蒸發(fā)。當(dāng)培養(yǎng)液顏色變化，或體積變化明顯時(shí)廢棄不用。4步驟4.1水樣接種量將水樣充分混勻后，根據(jù)水樣污染的程度確定水樣接種量。每個(gè)樣品至少用三個(gè)不同的水樣量接種。同一接種水樣量要有五管。相對(duì)未受污染的水樣接種量為10mL、1mL、0.1mL。受污染水樣接種量根據(jù)污染程度接種1mL、0.1mL、0.01mL或0.1mL、0.01mL、0.001mL等。使用的水樣量可參考下表1。表1接種