REGIα CDNA 過表達質(zhì)粒的構(gòu)建及對胃癌細胞增殖凋亡的影響

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1、第３９卷第５期浙江大學學報（醫(yī)學版）Ｖｏｌ３９Ｎｏ５２０１０年ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＺＨＥＪＩＡＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＭＥＤＩＣＡＬＳＣＩＥＮＣＥＳ）２０１０ｈｔｔｐ：∥ｗｗｗ．ｊｏｕｒｎａｌｓ．ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／ｍｅｄＤＯＩ：１０．３７８５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８９２９２．２０１０．０５．０１０ＲｅｇＩαｃＤＮＡ過表達質(zhì)粒的構(gòu)建及對胃癌細胞增殖凋亡的影響１１２１周群燕，陸曉鳳，王良靜，姒健敏（１．浙江大學邵逸夫臨床醫(yī)學研究所胃腸病實驗室，浙江杭州３１００１６；２．浙江大學醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院消化內(nèi)科，浙江杭州３１０００９）［摘要

2、］目的：構(gòu)建再生蛋白Ｉα（ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｇｅｎｅＩα，ＲｅｇＩα）的ｃＤＮＡ過表達質(zhì)粒表達載體，在體外評價其對胃癌細胞株增殖及其凋亡的影響。方法：根據(jù)ＲｅｇＩαｃＤＮＡ的全序列設(shè)計引物，用ＲＴＰＣＲ的方法從胃黏膜組織的總ＲＮＡ中獲?。遥澹纾搔恋模悖模危辆幋a區(qū)域的全序列，經(jīng)測序其與目的基因序列一致。將獲取的ＲｅｇＩα序列經(jīng)ＴＡ克隆和亞克隆至ｐＩＲＥＳ２ＥＧＦＰ真核表達質(zhì)粒載體中；將構(gòu)建的ＲｅｇＩα過表達質(zhì)粒載體ｐＩＲＥＳ２ＲｅｇＩαＥＧＦＰ轉(zhuǎn)染胃癌細胞株ＭＫＮ２８，并用空載體ｐＩＲＥＳ２ＥＧＦＰ作為對照，利用Ｇ４１８

3、篩選穩(wěn)定表達ｐＩＲＥＳ２ＲｅｇＩαＥＧＦＰ的ＭＫＮ２８細胞株。通過ＲＴＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ檢測轉(zhuǎn)染后細胞ＲｅｇＩα在ｍＲＮＡ及蛋白質(zhì)水平的表達；ＭＴＴ法和流式細胞儀分別檢測ＲｅｇＩα過表達后ＭＫＮ２８細胞增殖及拮抗Ｈ２Ｏ２誘導凋亡的變化。結(jié)果：成功構(gòu)建ＲｅｇＩαｃＤＮＡ的全序列表達質(zhì)粒。ＲＴＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ檢測顯示：轉(zhuǎn)染ｐＩＲＥＳ２ＥＧＦＰ質(zhì)粒的ＭＫＮ２８細胞ＲｅｇＩαｍＲＮＡ及蛋白表達水平明顯升高（Ｐ＜０．０５）；ＭＴＴ試驗顯示：轉(zhuǎn)染后細胞增殖能力明顯升高（Ｐ＜００５），而且拮抗Ｈ２Ｏ２凋亡的能力

4、增強（Ｐ＜０．０５）。結(jié)論：ＲｅｇＩα的過表達能明顯增強胃癌細胞ＭＫＮ２８的增殖和拮抗Ｈ２Ｏ２誘導凋亡的能力。［關(guān)鍵詞］胃腫瘤；再生／遺傳學；細胞系，腫瘤；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)；遺傳載體；質(zhì)粒；細胞凋亡；細胞增殖；轉(zhuǎn)染［中圖分類號］Ｑ７８［文獻標志碼］Ａ［文章編號］１００８９２９２（２０１０）０５０４９９０７ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＲｅｇＩαｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒａｎｄｉｔｓｅｆｆｅｃｔｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ１１２１ＺＨＯＵＱｕｎｙａ

5、ｎＬＵＸｉａｏｆｅｎｇ，ＷＡＮＧＬｉａｎｇｊｉｎｇ，ＳＩＪｉａｎｍｉｎ（１．ＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＣｌｉｎｉｃＭｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ，ＳｉｒＲｕｎＲｕｎＳｈａｗＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００１６，Ｃｈｉｎａ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，ＴｈｅＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖ

6、ｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１０００９，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔＲｅｇＩαｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒａｎｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＲｅｇＩαｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒＭＫＮ２８ｃｅｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＦｕｌｌｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＲｅｇＩαｃＤＮＡｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒｏｍｎｏｒｍａｌｇａｓｔｒｉｃｔｉｓｓｕｅｓａｍｐｌｅｓｂｙＲＴＰＣＲａｎｄｃｌｏｎｅｄｉｎｔ

7、ｏｐＩＲＥＳ２ＥＧＦＰｖｅｃｔｏｒ．ＲＴＰＣＲａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＲｅｇＩαｉｎＭＫＮ２８ｃｅｌｌｓ．ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＲｅｇＩαｏｎｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＭＴＴａｓｓａｙａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｗａｓ收稿日期：２０１００３２２修回日期：２０１００４２０基金項目：浙江省自然科學基金（Ｙ２０６２８０）；浙江省教育廳科研項目（Ｙ２００７００７１）．作者簡介：周群燕（１９

8、８２－），女，博士生，從事消化內(nèi)科工作．通訊作者：姒健敏（１９５７－），男，教授，博士生導師，主要從事消化內(nèi)科臨床及基礎(chǔ)研究；Ｅｍａｉｌ：ｓｉｊｍ＠ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ·５００·浙江大學學報（醫(yī)學版）第３９卷ｄｅｔｅｃ