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1、寧波美康生物科技股份有限公司美康試劑標準操作程序項目甘膽酸編號共6頁方法膠乳增強免疫比濁法用途用于人血清中甘膽酸(CG)濃度的定量測定制定人審核人批準人批準日期發(fā)布日期生效日期寧波美康生物科技股份有限公司目錄1實驗原理和檢驗目的2標本采集和處理2.1標本種類和采集方法2.2標本處理方法3試劑3.1試劑組成和包裝3.2試劑準備3.3試劑穩(wěn)定性4校準4.1校準品4.2校準品準備4.3校準品穩(wěn)定性4.4試劑校準周期5質(zhì)控5.1質(zhì)控品5.2可接受性判斷5.3質(zhì)控操作6操作7.計算方法8參考值9操作性能10結(jié)果處理11方法局限性12注意事項13參考文獻14技術(shù)服務寧波美康生物科技股份有限公司1實驗原理和
2、檢驗目的包被有甘膽酸抗體的膠乳顆粒可與血清中的甘膽酸產(chǎn)生凝集反應，形成抗原抗體復合物，其濁度高低在一定量抗體存在時與血清中CG成正比。通過測定特定波長的吸光度值，參照校準曲線即可計算出血清中CG的濃度。甘膽酸(Cholyglycine,CG)是膽酸與甘氨酸結(jié)合而成的結(jié)合型膽酸，是主要膽酸之一，在血清中主要以蛋白結(jié)合形式存在，分子量為465.6。甘膽酸在肝細胞合成，經(jīng)膽管排入膽囊貯存，餐后膽囊收縮，隨同膽汁排入小腸，參與脂肪的消化吸收。95%的膽酸在回腸末端重吸收，經(jīng)門靜脈輸送至肝臟由肝細胞攝取后，再泌入膽汁。當肝細胞受損或膽汁郁滯時，肝細胞不能有效地攝取經(jīng)腸肝循環(huán)達肝臟的甘膽酸，致使血中的CG
3、含量增高；膽汁郁滯時，肝臟排泄膽酸發(fā)生障礙而返流入血循環(huán)中，亦可使血中CG含量增高。急性肝炎、慢性活動性肝炎、肝硬化及膽石癥患者CG明顯升高；梗阻性肝病和藥物性膽汁郁積癥患者CG也會升高[1]。2標本采集和處理2.1.血清。樣本采集后請盡快離心測定。2.2干擾物質(zhì)：血紅蛋白≤5g/L，非結(jié)合膽紅素≤20mg/dL，結(jié)合膽紅素≤28.8mg/dL，乳糜≤1450FTU，類風濕因子≤150IU/mL對檢測結(jié)果無影響。3試劑3.1試劑組成試劑成分濃度試劑1三羥甲基氨基甲烷緩沖液12.1g/L氯化鈉5.85g/L聚乙二醇600020g/L試劑2包被有鼠抗人甘膽酸抗體的膠乳顆粒4.5g/L三羥甲基氨基甲
4、烷緩沖液12.1g/L牛血清白蛋白2g/L吐溫202mL/L3.2試劑準備本試劑為液體，可直接使用3.3試劑穩(wěn)定性試劑盒在2～8℃避光保存，可穩(wěn)定1年，試劑不得冷凍。試劑開瓶后，2～8℃可穩(wěn)定1個月。寧波美康生物科技股份有限公司4校準4.1校準品準備建議使用本公司校準品。本產(chǎn)品使用時一般采用多點校準。4.3校準品穩(wěn)定性校準品在2～8℃密封避光保存可穩(wěn)定1年。4.4試劑校準周期每2周或當發(fā)生以下情況時，建議重新校準：變更試劑批號；質(zhì)控值發(fā)生顯著偏移；生化分析儀進行了較大的維護。5質(zhì)控5.1質(zhì)控品按照質(zhì)控品使用說明書操作。建議每天進行一次質(zhì)控實驗。5.2可接受性判斷質(zhì)控物的檢測值應在給定質(zhì)控范圍，
5、或可以通過參加衛(wèi)生部室間質(zhì)評對實驗室的運作情況進行系統(tǒng)評估。5.3質(zhì)控操作每日進行樣本檢測之前首先應進行質(zhì)控操作，以考察系統(tǒng)的在控情況。如果檢測結(jié)果符合質(zhì)控要求則進行樣本操作；如果不符合質(zhì)控要求，則應重復質(zhì)控操作，以排除可能發(fā)生的偶然誤差；如果仍不符合質(zhì)控要求，則應考慮質(zhì)控品的重新準備、試劑的重新校準或更新、儀器的維護等。建議在樣本的檢測過程中和或結(jié)束后再次進行質(zhì)控操作，以考察樣本的檢測全過程的在控情況。寧波美康生物科技股份有限公司6操作6.1各機型參數(shù)設定羅氏P800生化分析儀檢測參數(shù):Test項目CGAssayCode/Time分析方法2PointRateWavelength（2nd/Pr
6、imary）波長（副/主）415/340AssayPoint測光點12/25ABSLimit吸光度界限/反應方向32000/INCREASES.Vol標本量15ReagentT1試劑1200ReagentT2試劑250ReagentT3試劑3 ReagentT4試劑4 CalibrationType校準類型Logit(4P)K計算系數(shù)K SDLimit標準差界限999DuplicateLimit離散度界限-32000～32000S1ABSLimit空白吸光度界限-32000～32000ExpectedValue參考值范圍 TechnicalLimit線性范圍 Unit單位mg/LSTD(1)C
7、onc校準品（1）#.##(混合血清)STD(2)Conc校準品（2）#STD(3)Conc校準品（3）#STD(4)Conc校準品（4）#STD(5)Conc校準品（5）#STD(6)Conc校準品（6）#7計算方法采用多點校準，多參數(shù)曲線方程（如logit/log）擬合。以△A可求得CG濃度。寧波美康生物科技股份有限公司8參考值小于2.7mg/L此數(shù)據(jù)來源于120個健康個體的實驗數(shù)據(jù)，僅供參考
