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《超聲波細(xì)胞粉碎機》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、基本原理????超聲波細(xì)胞粉碎機是利用超聲波在液體中的分散效應(yīng)，使液體產(chǎn)生空化的作用，從而使液體中的固體顆?；蚣?xì)胞組織破碎。超聲波細(xì)胞粉碎機由超聲波發(fā)生器和換能器二大部分組成。超聲波發(fā)生器將市電轉(zhuǎn)變成18-21KHz交變電能供給換能器。鋯鈦酸鋇壓電振子是換能器的心臟，它隨交變電壓以18-21KHz頻率作伸縮彈性形變，換能器隨之作縱向機械振動。振動波通過浸入在生物溶液中的鈦合金變幅桿產(chǎn)生空化效應(yīng)，激發(fā)介質(zhì)里的生物微粒劇烈振動。主要用途?????超聲波粉碎機能用于粉碎動物細(xì)胞、植物細(xì)胞、細(xì)菌、牙孢或組織。分散稀土和各類無機礦物粉。?????超聲波粉碎機是加速化學(xué)、生
2、物學(xué)、物理學(xué)的反應(yīng)速度和加速液體脫氣的理想裝置。?????超聲波粉碎機能配制近乎微米的百分之一大小的乳膠體；勻化“難混溶”的混合液；聚合一些物質(zhì)，析出另一些物質(zhì)。????總之，超聲波粉碎機能實現(xiàn)提取、粉碎、乳化、勻化、懸浮液、變異、氣懸體、加速脫溶、晶化及在電子顯微鏡下配制各種生物樣本之多種功能超聲波破碎細(xì)胞的常見問題???大腸桿菌表達(dá)外源蛋白，在超聲破碎的時候，用含有1%triton-X-100的PBS懸浮，然后超聲的效果較好，1%triton-X-100的作用還是很明顯的，對其他的一些細(xì)菌同樣起作用，比如鏈霉菌。???細(xì)菌沉淀直接加樣品1buffer，再加5
3、ul的巰基乙醇，混勻，離心，煮沸10min，直接上樣，染色脫色步驟如下:將膠放入適量的染色液微波爐里加熱1min(下次適當(dāng)補點醋酸即可),將染色液換成大量的水(自來水即可)在微波爐煮10min就可以。???在表達(dá)重組蛋白后超聲波破碎細(xì)胞，采用冰浴，400w，破2s停1s，但是不一會就產(chǎn)生大量泡沫，影響?了破碎功率，pbs和tris緩沖液都是這樣，最后都是破碎不完全，而我的目的蛋白就在這些未破碎的細(xì)胞中。?1*會產(chǎn)生氣泡是因為你的探頭位置沒放好。探頭一定要接近底部，約1cm（我一般是距底部0.5mm）。功?率根據(jù)儀器不同會有所不同，但你可以觀察液面，有波動但不要太
4、劇烈就好。?2*破3S停10S，破個二三十次看看。3*變幅桿位置擺放也要注意，聽聲音如果不對的話就要及時調(diào)整。另外可以從菌濃度方面考慮。在破碎時?試著加大體積,強度最好不要超過60%.?4*嘗試超8s停8s,對有些菌體蛋白來說，你的方法很難散熱，導(dǎo)致蛋白變性產(chǎn)生氣泡，最好停頓時間稍長一?些，這種情況多見于包涵體形式的蛋白。鏈霉菌（放線菌）超聲破碎的，用的方法條件是什么？?前處理一般就是配置成一定濃度的菌懸液。使用超聲破碎時采用的具體條件是：(1)取細(xì)菌的24h培養(yǎng)液于5000r／min下離心5min收集菌體．?(2)用pH7．5的Na2HPO-NaH2PO緩沖液
5、洗滌3次，再用該緩沖液將菌體配成1：3的菌懸液．置于40?mL大塑料試管內(nèi)．?(3)將大塑料試管置于冰浴中，采用超聲波破碎(功率200W，1／2”探頭，破碎30s，間歇30S)．?(4)破碎液于12000r／min下高速冷凍離心30min，收集細(xì)胞碎片和上清夜．????超聲破菌流程與上述基本一致，就是洗滌菌體也可以用預(yù)冷的生理鹽水或pH8的Tris－HCl，洗滌一次就?可以。另外，超聲劑量隨樣品量、菌體改變比較大，功率可以到400－600w，超5s，停5s，冰浴，要加終?濃度1mM的PMSF。為確定合適的超聲強度和次數(shù)，有必要隨時鏡檢觀察菌體是否完全破碎。???
6、?放線菌屬于原核生物系統(tǒng)進(jìn)化樹上的（G＋C）摩爾百分含量（mol％）高的革蘭氏陽性菌?（Eubacteria）分枝類群，它雖然具有原核生物特有的分子生物學(xué)特性，但在其不同類群中，細(xì)胞壁的化學(xué)?組分變化很大。???在做大腸桿菌超聲時，采用的是400W，超5停5的方法，效果不錯，但是用在鏈霉菌上，似乎沒什么效?果。會不會就是由于細(xì)胞壁組成差異造成的呢，因為大腸桿菌式屬于革蘭氏陰性菌的。???再有鏡檢是檢驗破碎效果,但是細(xì)胞破碎程度和我需要的酶獲得之間有正比關(guān)系嗎？破碎時間長也會影響到?酶的活性。所以想問問anaisai戰(zhàn)友，你提供的“功率200W，1／2”探頭，破碎
7、30s，間歇30S”的條?件好像是用于破碎鏈霉菌孢子的，也可以用于發(fā)酵離心后的菌泥嗎？如果可以，你破碎的全程時間大概是多?少呢？????如果你需要的是胞內(nèi)酶，細(xì)胞破碎程度和需要的酶獲得之間基本上有正比關(guān)系。破碎時間長的確會影響到?酶的活性。這就需要在最佳的破碎時間和酶活性之間做出判斷，最直接的辦法是先繪制相關(guān)曲線（酶活性和?時間的關(guān)系曲線）。???實驗中，破碎的是棒狀桿菌（也是很難破壁的G+菌），破碎時間控制在30min左右，酶活較好。?如果是基質(zhì)菌絲的話,好可以考慮用溶菌酶處理一下.一般來講這幾種方法讀可以的:?一,液氮研磨?二,用frenchpress破碎?
8、三，超聲波破碎四，溶菌酶
