同步熒光法測定色氨酸

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1、華,一北農(nóng)學(xué)報一同步熒光法測定色氨酸武興德任道生’北京甫農(nóng)林科學(xué)院蔬菜中心北京摘要、、。用同步熒光法測定了玉米小麥花粉等樣品中的色氨酸一般氨基酸分析用,。,氨基酸分析儀和液相色譜儀而色氨酸在酸解樣品時被分解測不出要測定色氨酸,,。、需要重新制備樣品改變體系比較繁雜在多種氨基酸中僅有色氨酸酪氨酸和苯丙氨酸有天然熒光,色氨酸的天然熒光最強(qiáng)提供了直接測定的有利條件。用,,,氫氧化鈉堿解樣品在腸℃時保溫小時然后稀釋調(diào)為一之,。,間定容最后用同步光譜掃描的辦法測定即激發(fā)波長和發(fā)射波長的單色器之間,,。固定一定的波長差△入同時掃描得到一個同步熒光光譜其濃度和,。熒光強(qiáng)度有

2、良好的線性關(guān)系測定范圍是一協(xié)本方法彌補(bǔ)了在氨,,?；釡y定中酸解樣品時色氨酸被分解測不出的不足而且方法比較簡單靈敏關(guān)鍵詞同步熒光法色氨酸材料和方法、一儀器與試劑日立一熒,八型酸度計,。光分光光度計一烘箱,,準(zhǔn)確稱取生物制品色氨酸毫克用溶解倒入毫升容量瓶中然后。用稀釋至刻度即件卜,,取的色氨酸標(biāo)準(zhǔn)液毫升移入毫升容量瓶中用稀釋到?？潭燃床飞彼醾溆?、二操作,,稱取一毫克樣品到毫升試資中加入毫克可溶性淀粉再加入,。,,,毫升在火吹上封管把封好后的試管拿到烘箱中加熱到℃左右保持小時取出。,,,冷卻將堿提取液移入毫升容量瓶中加入蒸餾水到毫升用鹽酸調(diào)為一,,。然后用蒸餾水

3、定容到毫升搖勻取出部分液體測熒光。本文于年月日收到。任道生現(xiàn)在北京市實驗動物中心工作華北農(nóng)學(xué)報卷,,、按上述操作方法取不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)色氮酸測定熒光強(qiáng)度如圖琦壓且毛,八曰︺︸、,刨哪半稱祠孚空白了、件、件、卜、件、俘、件、廠件、林、,么入色氛酸濃度拼圖不同濃度色氮酸的光譜圖色氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線圖是由圖的數(shù)據(jù)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線。從圖可以看出色氨酸的濃度與熒光強(qiáng)度有良好。的線性關(guān)系結(jié)果與討論、一高溫堿解過程快,,?！鎵A解過程較慢可改用℃高溫水解小時同樣可以得到滿忿的結(jié)果表色氨酸濃度與熒光強(qiáng)度關(guān)系色氨酸標(biāo)準(zhǔn)協(xié)相對熒光強(qiáng)度弓,,,從試驗數(shù)據(jù)可看出色氨酸濃度和熒光強(qiáng)度相關(guān)極顯著相關(guān)

4、方程為。℃高溫水解只需小時,二。,相關(guān)系數(shù)肯省時問由于水解時溫度高管內(nèi)的壓力增,,。大管易損壞因此封管要牢、二酸堿度對色氨酸測定的影響一,‘,,取同濃度相等體積的色氨酸加到棄墩瓶卜調(diào)節(jié)不同的工位觀察熒光強(qiáng)度的變?；碇蹬c熒光強(qiáng)度的關(guān)系值弓。相對帶平強(qiáng)崖弓弓,值對色氨酸的熒光強(qiáng)度影響很大原因是色氨酸的量子效率依賴其功能團(tuán)的電離程期武興德等同步熒光法測定色氨酸,。,一,度即介質(zhì)的與它的量子產(chǎn)率直接有關(guān)在值為時色氨酸呈一一,,此時’一‘量子’產(chǎn)率最高‘為一’’值在’一之間’色氨“酸呈喜。一一止量子’產(chǎn)率為一一一、“一一一“一一一“一“,,,。。在值小于時色氨酸呈玄入

5、一一此時量子產(chǎn)率很低只有因,,。此在水解液中調(diào)值在一之間熒光強(qiáng)度最大靈敏度最高、三不同取樣的實驗,。稱取不同量磨細(xì)后的小麥堿解后測定表小麥取樣最與芡光強(qiáng)度關(guān)系取樣量相對熒光強(qiáng)度,了,,,熒光強(qiáng)度隨取樣量的增大而增大其線性方程是相關(guān)極顯著,。即在一毫克范圍內(nèi)堿分解樣品不扁要改變堿和可溶性淀粉的用量、四同步光譜特點(diǎn),,半峰寬度變窄峰變尖提高了選擇。性激發(fā)波長與發(fā)射波長之間固定波長差△入是毫微米,得到同步掃描熒光光譜半,峰寬毫米而單掃描的熒光光譜的半峰。,寬毫米這樣用同步掃描測量方法半,。峰寬窄了近毫米提高了分辨率而同么入夭系很大,步掃描光譜圖形狀與選擇的圖熒光光譜

6、半峰寬比較,,選擇合適可使峰銳化同時除去一些干擾、濃度拼的色氨酸,同步掃描半峰寬。同步掃描熒光光譜強(qiáng)度是。雜質(zhì)的影響毫米、,··二。二藝協(xié),二。。二濃度的色氨酸固定激發(fā)波長掃入入。描發(fā)射波長時的半峰寬毫米。二。二而△入入一入··,。,‘一一二。則入△入入,二式中為常數(shù)為被測物質(zhì)濃度為發(fā)射波長一定時激發(fā)光譜對熒光強(qiáng)度的貢。,。丁。,獻(xiàn)久為發(fā)射波長入為激發(fā)波長△入為固定波長差為激發(fā)波長一定時發(fā)射光。,。,二譜對熒光強(qiáng)度的貢獻(xiàn)這樣同步光潔強(qiáng)度不僅取決于也取決于和所選擇的波長。,‘,,,差△入△入選擇合適得到的石步掃描元譜半峰寬交窄在熒光分析中對提高選擇性。消除其它雜

7、質(zhì)干擾提供了一個途徑,,、、,總之對色氨酸分析一般稱取。屯克小支巨米花粉等粉碎樣品按述操作進(jìn),。行均可測出色氨酸的含址華日北匕農(nóng)衣箏學(xué)報狠一一一一一一一一一一一一一參考文獻(xiàn)郭堯君《熒光實驗技術(shù)及其在分子生物學(xué)中的應(yīng)用》,北京,科學(xué)出,〕一版社一雷世寰用同步,,二〔〕熒光光譜測定不井花《分析化學(xué)》巧一,,平,,〔〕大久保邦彥高田通之助陸男同期勵起熒光分析法之檢討《一島津評論別刷》一。夕獷,尸陰夕‘,夕五了,工,,℃玉一,二?！骶昧艘患?/p>