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《在線免疫親和凈化 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜快速測定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第39卷分析化學(xué)(FENXIHUAXUE)研究報告第9期2011年9月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1341～1346DOI:10．3724/SP．J．1096．2011．01341在線免疫親和凈化-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜快速測定中草藥及中成藥中10種真菌毒素*趙孔祥葛寶坤陳旭艷許泓(天津出入境檢驗檢疫局，天津300461)摘要將復(fù)合毒素免疫親和柱的柱填料填充至不銹鋼柱(35mm×4．6mm)，制成可重復(fù)使用的在線免疫親和凈化柱。在線凈化過程的上樣溶劑為磷酸鹽緩沖液(PBS，pH7．4)，清洗溶劑為水
2、，轉(zhuǎn)移溶劑為乙腈-水(1∶1，V/V)。采用PBS/甲醇溶液提取樣品中真菌毒素，提取液直接進行在線免疫親和凈化-液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜分析，本方法可同時測定中草藥及中成藥中10種真菌毒素(伏馬毒素B1、伏馬毒素B2、T-2毒素、HT-2毒素、赭曲霉毒素A(OTA)、玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇)。本方法的定量限(LOQ)為1～5!g/kg，各基質(zhì)在3個水平添加回收率(n=6)為62．3%～107．1%;相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2．1%～15．0%。關(guān)鍵詞在線免疫親和凈化;中草藥;中成藥;
3、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜;真菌毒素1引言［1］近年來，中藥中存在的真菌毒素備受關(guān)注。藥用植物采集后如干燥不及時、貯存不當(dāng)及制備與［2］加工過程中處理不善，均可能污染各種真菌，并產(chǎn)生真菌毒素。在目前已發(fā)現(xiàn)的300多種真菌毒素中，黃曲霉毒素(Aflatoxins)、赭曲霉毒素(Ochratoxin)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone)、伏馬菌素(Fumo-nisins)、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol)、T-2毒素(T-2toxin)、雜色曲霉素(Sterigmatocystin)［3，4］等與人體健康安全相關(guān)。［5］檢測真
4、菌毒素的方法有生物鑒定法、化學(xué)分析法、儀器分析法和免疫分析法等。近年來，抗原抗［6］體特異性結(jié)合的免疫親和層析技術(shù)，在真菌毒素及藥物殘留的前處理凈化領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。免疫親和層析聯(lián)用技術(shù)，也稱在線(On-line)免疫親和色譜，通過柱切換技術(shù)將免疫親和凈化柱串［7］［8］聯(lián)于HPLC或HPLC-MS/MS進行檢測，樣品的純化及分析均實現(xiàn)自動化。肖付剛等采用免疫親和［9］層析-液質(zhì)聯(lián)用法檢測藍藻中的微囊藻毒素。Moretti等將免疫親和柱直接串聯(lián)到分析柱上，測定了牛［10］奶和肉中氯霉素。Benjamin等建立了免疫親和凈化與LC/MS
5、或LC/MS/MS聯(lián)用的克倫特羅檢測方［11］［12］法。Holtzapple等使用高效免疫親和色譜柱實現(xiàn)了血清中氟喹諾酮類藥物在線凈化。Liang等制備了在線擬除蟲菊酯類殺蟲劑的免疫親和柱，實現(xiàn)復(fù)雜樣品中此類化合物的高效、快速檢測。本研究采用制備的在線免疫親和凈化柱，實現(xiàn)了中草藥及中成藥中的赭曲霉毒素A等10種真菌毒素的在線凈化-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。本方法使用了高選擇性的免疫親和凈化技術(shù)，降低了凈化成本。2實驗部分2．1儀器與試劑TSQQuantumUltraAM三重四極質(zhì)譜儀、Turboflow在線液相色譜凈化系統(tǒng)(兩臺Tran
6、scend600泵及CTC多功能進樣器)，配有AriaOS及Xcalibur操作軟件(美國ThermoFisher公司);振蕩器(日本YAMATO公司);3-18K高速離心機(德國Sigma公司);MILLI-Q純水器(美國Millipore公司)。復(fù)合毒素免疫親和柱(myco6in1，美國Vicam公司)。甲醇、乙腈和甲酸(色譜純，美國Dikma公司);醋酸銨(色譜純，天津光復(fù)精細(xì)化工研究所);NaCl，2011-01-04收稿;2011-05-20接受本文系國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局科研項目(No．2008IK144)資助*E-mai
7、l:wwwkongxiang@163．com1342分析化學(xué)第39卷KCl，KH2PO4，Na2HPO4·12H2O，NaCl，HCl(分析純，天津風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司)。磷酸鹽緩沖液(PBS，pH7．4)。真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品:黃曲霉毒素B1(AFB1，純度99%)、黃曲霉毒素B2(AFB2，純度99%)、黃曲霉毒素G1(AFG1，純度99%)、黃曲霉毒素G2(AFG2，純度99%)、赭曲霉毒素A(OTA，純度99%)、HT-2毒素(HT-2，純度98%)、T-2毒素(T-2，純度98%)、伏馬毒素B1(FB1，純度99%)、伏馬毒素B
8、2(FB2，純度99%)和玉米赤霉烯酮(Zearalenone，純度為99%)，均購于美國Alexis公司;10mg/Lα-玉米赤霉醇(α-Zearalanol)、β-玉米赤霉醇(β-Zearalanol)
