生化項(xiàng)目間試劑的交叉污染及其避免方法

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1、生化自動(dòng)分析儀項(xiàng)目間試劑的交叉污染及其避免方法很多類型的全自動(dòng)生化分析儀因其清洗系統(tǒng)的工作模式所致，一個(gè)項(xiàng)目對(duì)緊隨其后的一個(gè)甚至幾個(gè)項(xiàng)目的測(cè)定會(huì)帶來(lái)一定程度的試劑污染，并且隨著儀器使用時(shí)間的累加，儀器狀況的下降，試劑交叉污染的程度會(huì)有所加劇。在實(shí)際工作中主要表現(xiàn)為某一項(xiàng)目的測(cè)定結(jié)果一直符合臨床要求，可是一段時(shí)間以后測(cè)定結(jié)果趨高，并且日益明顯；而單獨(dú)測(cè)定該項(xiàng)目時(shí)測(cè)值又合理起來(lái)，給日常工作帶來(lái)極大的不便。因此避免試劑間的干擾，變的非常重要。試劑間的干擾有兩個(gè)的原因：一是試劑中含有下一個(gè)測(cè)試所要測(cè)定的底物，或是含有的某種

2、試劑成分與下一反應(yīng)所要測(cè)定的底物有作用，因而直接干擾下一反應(yīng)的測(cè)定結(jié)果；另一個(gè)則是該試劑所引導(dǎo)的反應(yīng)對(duì)下一個(gè)項(xiàng)目的反應(yīng)進(jìn)程帶來(lái)了間接的干擾，因?yàn)樵谟性噭┪廴镜那闆r下，下一項(xiàng)目所測(cè)定的是前后兩個(gè)項(xiàng)目反應(yīng)的綜合作用結(jié)果。下面通過(guò)對(duì)試劑成分的分析和相應(yīng)試驗(yàn)來(lái)找出試劑交叉污染可能帶來(lái)的情況，進(jìn)而指導(dǎo)相應(yīng)的項(xiàng)目調(diào)整和結(jié)果分析。1試劑間可能發(fā)生的干擾情況1-1ALT（IFCC）、AST（IFCC）試劑中含有高活力LD成分，有可能會(huì)對(duì)LD的測(cè)定帶來(lái)干擾。1-2ALP（IFCC）、CK（NAC-activated）、CK-MB（N

3、AC-activated）、CO2（PEPC）、α-Amy(EPS)等試劑中使用磷酸緩沖液，可能會(huì)對(duì)其后的Mg2+測(cè)定帶來(lái)干擾。1-3ChE(Butyrylthiocholine)、TC(ChOD-PAP)、Glu(GOD-PAP)、UA(Uricase)、α-HBDH(DGKC)等試劑使用磷酸緩沖液，可能會(huì)對(duì)無(wú)機(jī)磷的測(cè)定帶來(lái)干擾。1-4CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）試劑中含有Glu成分，其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反應(yīng)過(guò)程，因此可能對(duì)Glu測(cè)定帶來(lái)干

4、擾，尤其對(duì)Glu的HK法測(cè)定可能帶來(lái)嚴(yán)重干擾。1-5Mg2+試劑(Calmagite)中含有EGTA成分，為Ca2+絡(luò)合劑，可能對(duì)Ca2+的測(cè)定帶來(lái)干擾。1-6個(gè)別試劑以甘油做酶的保護(hù)劑，因此可能對(duì)TG的測(cè)定帶來(lái)干擾，等等。1-7低密度脂蛋白、甘油三酯、膽固醇的試劑成分中都含有CE、CHOD、POD酶，都會(huì)與血清成分反應(yīng)，生成的中間反應(yīng)產(chǎn)物是H2O2濃度,因?yàn)榈兔芏戎鞍缀透视腿z測(cè)單位都是mmol/L級(jí),而尿酸檢測(cè)單位是μmol/L級(jí),二者之間相差1000倍,故檢測(cè)尿酸的反應(yīng)杯中只要?dú)埩魳O少量的低密度脂蛋白和膽

5、固醇試劑就可產(chǎn)生大量的H2O2,直接導(dǎo)致尿酸的檢測(cè)結(jié)果的升高。1-8葡萄糖對(duì)尿酸試劑的干擾GLU(OX)與UA測(cè)定原理均采用Trider's反應(yīng)方法,試劑探針殘留攜帶的GLU帶入到UA反應(yīng)體系,發(fā)生血糖反應(yīng)其產(chǎn)物紅色醌亞胺與UA產(chǎn)物紅色醌亞胺顏色疊加,而血清中正常血糖含量遠(yuǎn)高于尿酸水平,從而導(dǎo)致UA結(jié)果嚴(yán)重偏高。很多類型的全自動(dòng)生化分析儀因其清洗系統(tǒng)的1-9膽固醇(TC)、甘油三醋(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL)會(huì)對(duì)總膽汁酸檢測(cè)的影響，導(dǎo)致膽汁酸測(cè)定值增加。這些試劑中為了保證反應(yīng)

6、充分，往往含有膽酸鈉成分或是一些脂類水解促進(jìn)劑等，這些物質(zhì)導(dǎo)致了樣本膽汁酸測(cè)定的攜帶性增高及內(nèi)源產(chǎn)物等副反應(yīng)性增高。1-10谷丙中的含有的酮戊二酸NADH反應(yīng)體系會(huì)干擾總膽汁酸檢測(cè)中的Thio-NAD－Thio-NADH循環(huán)指示體系，導(dǎo)致測(cè)定值偏低2干擾的排查和發(fā)現(xiàn)事實(shí)上各個(gè)公司所提供的產(chǎn)品說(shuō)明書常不能夠全面反映試劑組成的情況，因此通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)試劑交叉污染可能帶來(lái)的干擾變得相當(dāng)重要。下面以兩個(gè)試驗(yàn)來(lái)加以說(shuō)明。2-1將某一試劑作為樣本進(jìn)行全套項(xiàng)目測(cè)定，考察結(jié)果的情況，進(jìn)而確定發(fā)生試劑交叉污染時(shí)造成直接干擾的項(xiàng)目。2-

7、21將一份樣本分為兩份，一份加生理鹽水或其他適當(dāng)?shù)南♂屢?，另一份加等量的試劑，同時(shí)測(cè)定、考察結(jié)果的變化，進(jìn)而確定可能發(fā)生試劑交叉污染時(shí)造成干擾的項(xiàng)目。進(jìn)行這一實(shí)驗(yàn)時(shí)，使用半自動(dòng)生化分析儀可能會(huì)得到更為理想的結(jié)果，尤其是針對(duì)雙試劑反應(yīng)時(shí)，R1、R2加入時(shí)機(jī)可以得到更為精確的控制。此外，由于試劑成分的復(fù)雜多樣性，實(shí)時(shí)儀器狀況的獨(dú)特性，可能發(fā)生的試劑間的交叉污染的情況不盡相同。3干擾的避免試劑間的嚴(yán)重干擾會(huì)極大的影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此隔絕二者間的聯(lián)系非常必要。一般在安排項(xiàng)目順序時(shí)要求兩個(gè)項(xiàng)目間至少要有一個(gè)非干擾項(xiàng)目，

8、而最徹底的做法則是將被干擾項(xiàng)目置于干擾項(xiàng)目之前，以消除干擾發(fā)生的可能。同時(shí)要求檢驗(yàn)人員對(duì)儀器的工作狀態(tài)要了如指掌，并在一個(gè)樣本的項(xiàng)目選擇或一個(gè)樣本的最后一項(xiàng)與下一樣本的第一個(gè)項(xiàng)目選擇時(shí)對(duì)于試劑交叉污染的可能性加以考慮，合理安排項(xiàng)目順序，以便得到更為合理的結(jié)果。通常情況下可以按照以下順序安排項(xiàng)目：ALT、AST、ALP、γ–GT、ChE、TP、Alb、TBIL