細(xì)菌生化試驗(yàn)

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1、1糖類發(fā)酵試驗(yàn)（1）培養(yǎng)基需氧菌適用的培養(yǎng)基配方：蛋白胨1g，氯化鈉0.5g，蒸餾水100ml，糖物質(zhì)0.5-1g，0.2%溴麝香草酚藍(lán)水溶液1.2ml配制：除指示劑外，溶解各成分，調(diào)ph值為7.4-7.6，加入指示劑混勻，分裝試管。管內(nèi)事先裝有倒置的小玻璃管。經(jīng)高壓滅菌20min。厭氧菌糖發(fā)酵培養(yǎng)基配方：蛋白胨20g，氯化鈉5g，糖物質(zhì)10g，硫乙醇酸鈉1g，瓊脂1g，蒸餾水1000ml，1.6%溴甲酚紫酒精溶液水溶液1ml配制：除指示劑外，溶解各成分，調(diào)ph值為7.2-7.4，加入指示劑，高壓滅菌。血清半固體糖發(fā)酵培養(yǎng)基配方：0.3%肉膏100ml，瓊脂0.3g，糖物質(zhì)0.5-1g，0

2、.5%酸性復(fù)紅2ml，兔血清或小牛血清10ml。配制：爭(zhēng)取0.3%肉膏100ml，加入瓊脂，煮沸融化后，加入糖類物質(zhì)及指示劑，高壓滅菌，待培養(yǎng)基冷至50℃左右，繳入經(jīng)56℃滅活30min的兔血清10ml，分裝于無菌試管，無菌檢查后備用。(2)恒溫培養(yǎng)箱，高壓鍋，電爐，搪瓷缸以及接種針等。實(shí)驗(yàn)步驟：（1）按照上述的培養(yǎng)基配方，根據(jù)需要選擇配制培養(yǎng)基，高壓滅菌并作無菌檢查后備用。（2）取培養(yǎng)18-24h的試驗(yàn)菌，接種于培養(yǎng)基中，置于37℃培養(yǎng)數(shù)小時(shí)至2周后觀察結(jié)果。（3）結(jié)果記錄：指示劑由紫色變?yōu)辄S色，表示糖類發(fā)酵產(chǎn)酸，以“+”表示；若指示劑由紫色變?yōu)辄S色且試管內(nèi)倒置的小管內(nèi)有氣泡出現(xiàn)，則表示

3、產(chǎn)酸產(chǎn)氣，以“o+”表示；若指示劑顏色未改變，則表示對(duì)糖類不發(fā)酵，以“-”表示。2甲基紅（MR）試驗(yàn)器材準(zhǔn)備（1）培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水配方：蛋白胨0.7g，磷酸氫二鉀0.5g，葡萄糖0.5g，蒸餾水0.5g。配制：將上述各成分混于蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)pH值為7.2-7.4，濾紙濾過，分裝于小試管內(nèi)，每管3-5ml，加塞包好，高壓滅菌。（2）試劑：甲基紅0.02g、95%酒精60ml，蒸餾水40ml.（3）恒溫培養(yǎng)箱、高壓鍋、電爐、搪瓷缸、玻棒以及接種環(huán)。實(shí)驗(yàn)步驟（1）將待檢菌接種于培養(yǎng)基中，置于37℃培養(yǎng)48h。（1）取少量培養(yǎng)液于另一個(gè)試管中，加入幾滴指示劑，觀察顏色變化，若無顏色變

4、化可繼續(xù)培養(yǎng)4-5d再進(jìn)行試驗(yàn)。（2）結(jié)果判定：培養(yǎng)液呈現(xiàn)紅色，為甲基紅試驗(yàn)陽性，呈現(xiàn)黃色者為陰性。3維培二氏試驗(yàn)（VP試驗(yàn)）器材準(zhǔn)備（1）培養(yǎng)基：同MR試驗(yàn)。（2）試劑奧梅拉氏試劑：0.3g肌酸或肌酐溶于100ml40%氫氧化鉀即成。貝立脫氏試劑：甲液為6%a-萘酚酒精溶液，乙液為16%氫氧化鈉溶液。硫酸銅試劑：1g硫酸銅溶于40ml氨水中，再加10%氫氧化鈉至1000ml。（3）恒溫培養(yǎng)箱，高壓鍋，電爐、搪瓷缸、玻棒以及接種環(huán)等。試驗(yàn)步驟（1）將被檢細(xì)菌接種到葡萄糖蛋白胨水中，置于37℃培養(yǎng)48h。（2）在培養(yǎng)物中加入等量的奧梅拉氏試劑，混合，或1ml培養(yǎng)物加入0.5ml貝立脫氏試劑甲

5、液和乙液振蕩混合，觀察結(jié)果。（3）結(jié)果判定：在0.5min內(nèi)呈現(xiàn)粉紅色反應(yīng)為陽性；長(zhǎng)時(shí)間無反應(yīng)，置于37℃培養(yǎng)4h或室溫過夜，顏色仍不變者為陰性。4，硫化氫試驗(yàn)器材準(zhǔn)備（1）培養(yǎng)基醋酸鉛瓊脂培養(yǎng)基（一）配方：肉湯瓊脂100ml。硫代硫酸鈉0.25g，10%的醋酸鉛水溶液3ml。配制：加熱融化肉湯瓊脂，冷至60℃，加入硫代硫酸鈉，使其溶解。調(diào)節(jié)pH值至7.2，高壓滅菌，取出冷至60℃時(shí)加入預(yù)防滅菌的10%的醋酸鉛水溶液，混勻，無菌分裝小試管，直立凝固。醋酸鉛瓊脂培養(yǎng)基（二）配方：蛋白胨20g，磷酸氫二鈉2g，葡萄糖1g，瓊脂2g，10%的醋酸鉛水溶液2ml,蒸餾水1000ml。配制：將除醋酸

6、鉛以外的各成分混合于蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)pH值為7.0-7.4，然后加入醋酸鉛水溶液，混合均勻，分裝試管內(nèi)，高壓滅菌，取出搖勻，直立凝固呈柱狀。三氯化鐵明膠培養(yǎng)基配方：硫胨25g，氯化鈉5g，牛肉膏7.5g，明膠120g，10%三氯化鐵水溶液5ml。配制：將除三氯化鐵水溶液以外的成分混合，加熱融化并高壓滅菌，趁熱加入預(yù)先滅菌的10%三氯化鐵水溶液，混勻，無菌分裝小試管，直立凝固。（2）恒溫培養(yǎng)箱，高壓鍋，電爐，搪瓷缸等（3）小試管。玻棒、接種環(huán)以及pH試紙等。實(shí)驗(yàn)步驟：1醋酸鉛瓊脂法（1）用接種針取待檢細(xì)菌，沿培養(yǎng)基的試管壁作穿刺接種，37℃培養(yǎng)1-2d，必要時(shí)可延長(zhǎng)5-7d。（2）結(jié)

7、果判定：延穿刺線的培養(yǎng)基變?yōu)楹谏珵殛栃?，否則為陰性。2三氯化鐵明膠培養(yǎng)基法（1）用接種針取待檢菌沿管壁作穿刺接種，37℃培養(yǎng)觀察2-7d。（2）結(jié)果判定：明膠變黑色為陽性，否則為陰性。本文檔原文來自于胡佳學(xué)主編的《獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》，由本人整理獲得。