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《蔥內(nèi)生真菌抑菌活性初探》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第二十三卷第九期楚雄師范學(xué)院學(xué)報Vol123No192008年9月JOURNALOFCHUXIONGNORMALUNIVERSITYSep12008蔥內(nèi)生真菌抑菌活性初探312233李光富汪正威李雪玲(11楚雄醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校,云南楚雄675005;21楚雄師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系,云南楚雄675000)摘要:目的:從蔥的根、莖、葉中分離內(nèi)生真菌,并進(jìn)行初步抗菌活性檢測,得到具有高抗菌活性的菌株。方法:11用PDA培養(yǎng)基分離蔥的內(nèi)生真菌;21用查氏培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵實驗。31進(jìn)行濾紙片抑菌實驗。結(jié)果:從蔥中分離出的17株內(nèi)生真菌,均具有抗菌活性,其中,
2、抑菌圈直徑大于110cm的高抗菌性菌株有11株,占總分離菌株數(shù)的64171%。結(jié)論:蔥內(nèi)生真菌具有類似宿主植物蔥一樣的廣泛抗菌性(分離得到的17株內(nèi)生真菌均具有抗菌性),但由于宿主植物本身所具有的強(qiáng)抗菌性,使分離得到的菌株種屬多樣性較少。關(guān)鍵詞:蔥;內(nèi)生真菌;抑菌活性中圖分類號:Q93文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:1671-7406(2008)09-0075-06蔥(Alliumfistulosum)是百合科Liliaceace蒜屬植物,是中國的一種很普遍的調(diào)味品或蔬菜。具有解熱、祛痰、促進(jìn)消化吸收、防癌抗癌、抗菌和抗病毒等藥理作用。19世紀(jì)巴斯德首先發(fā)
3、現(xiàn)蒜屬植物的抗菌活性,我國學(xué)者從20世紀(jì)50年代開始研究證實,后來研究發(fā)現(xiàn),蒜屬植物中起殺菌、抑菌作用的主要是大蒜素和其他一些有揮發(fā)性硫醚化合物。而一直以來只有直接從大蒜或蔥等含有大蒜素的植物中提取或采用合成法等傳統(tǒng)方法來獲取大蒜素,耗材大,收效低。內(nèi)生真菌(endophyticfungi)是指那些在其生活史中的某段時期或全部階段生活在植物[1]組織內(nèi),對植物組織沒有明顯引起病害癥狀的一類真菌。近年來,國內(nèi)外從多種植物內(nèi)[2—3]生真菌中篩選出各種生理活性物質(zhì)陸續(xù)見有關(guān)報道,內(nèi)生真菌產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)存在極大的多樣性(如:抗腫瘤、抗病毒、抗細(xì)菌、抗
4、真菌、抗蟲等物質(zhì)),表明植物內(nèi)生真菌能夠產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新、功能特殊的次生代謝產(chǎn)物,是新化合物、新藥物的潛在資源,它們在[4]醫(yī)藥、工業(yè)、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用前景。由此可見,植物內(nèi)生真菌是一類潛在的產(chǎn)生生物活性物質(zhì)的巨大資源。尤其是某些內(nèi)生真菌還可以產(chǎn)生和宿主植物相同或相似的[5]生理活性成分。本實驗的目的是通過分析蔥的內(nèi)生真菌是否具有與其宿主(蔥)相同或相似生理活性成分。為內(nèi)生真菌抗菌活性開發(fā)應(yīng)用做鋪墊研究。3收稿日期:2008-06-10作者簡介:李光富(1967—),男,楚雄醫(yī)藥高等專科學(xué)校副教授,主要從事生理學(xué)的教學(xué)與研究。33通訊作者:李雪玲
5、(1966—),女,副教授,E-mail:lxlyaoan@cxtc1edu1cn?！?5·楚雄師范學(xué)院學(xué)報2008年第9期楚雄師范學(xué)院學(xué)報2008年第9期1材料111植物來源:采自楚雄陳家槽子村菜地,每次現(xiàn)做現(xiàn)采。112指示菌來源11211革蘭氏陰性菌:大腸桿菌Escherichiacoli。11212革蘭氏陽性菌:金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus、枯草芽孢桿菌Bacillus[7]subtilis、蘇云金芽孢桿菌Bacillusthuringiensis以上指示菌取自楚雄師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系微生物實驗室。2實驗方法21
6、1分離蔥中的內(nèi)生真菌21111PDA培養(yǎng)基的配制:馬鈴薯(去皮)200g,蔗糖20g,瓊脂20g,水1000ml。3配制方法如下:將馬鈴薯洗凈去皮,切成約2—3cm的小塊,放入2000ml的燒杯中煮沸30min,注意用玻棒攪拌以防糊底,然后用雙層紗布過濾,取其濾液加糖,再補足水至[8]1000ml,自然pH值。21112內(nèi)生真菌的分離純化及保藏:取新鮮健康的小蔥,用自來水洗凈,稍微瀝干水分后,將小蔥切成6—7cm長的小段,再用以下方法進(jìn)行表面消毒:75%酒精漂洗3min→無菌水沖洗4—5次→011%升汞漂洗30s→無菌水沖洗6—7次。經(jīng)上述處理后的
7、樣品,在無菌狀態(tài)下切成012—013cm×012—013cm的小片,放入滅過菌的帶有干濾紙片的培養(yǎng)基中,去除多余水分后,再植于培養(yǎng)基中,用保鮮膜包好,于28℃條件下倒置培養(yǎng);同時,將剛表面消毒的小蔥片段,不經(jīng)剪切直接在培養(yǎng)基上表面輕抹,做為對照。培養(yǎng)2天后,對照培養(yǎng)基中無真菌長出,其它培養(yǎng)基中開始有菌落形成,挑取從植物組織處長出的菌落,轉(zhuǎn)接入PDA培養(yǎng)基中,經(jīng)過兩次轉(zhuǎn)接,視純化程度,再將其轉(zhuǎn)接入PDA斜面試管中保藏。經(jīng)純化后的菌株即為蔥的內(nèi)生真菌。212內(nèi)生真菌發(fā)酵培養(yǎng)21211查氏培養(yǎng)基的配制:也稱為蔗糖硝酸鈉培養(yǎng)基。配方如下:蔗糖30g,NaN
8、O32g,K2HPO41g,MgSO4·7H2O015g,KCl015g,FeSO4·7H2O0101g,水1000ml,
