淀粉酶混合使用

《淀粉酶混合使用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、萬方數(shù)據(jù)第35卷第4期2005年12月工業(yè)微生物Industia【Microbi。b日Vd35No4Dec2005復(fù)合淀粉酶酶解生淀粉機(jī)理探討姚衛(wèi)蓉，姚惠源(江南大學(xué)食品學(xué)院，無錫214036)摘要以生土豆淀粉為原料，考察了復(fù)合生淀粉酶水解機(jī)制。發(fā)現(xiàn)單個(gè)糖化酶的酶解遵循MichaeliS_M∞t∞機(jī)制，而*淀粉酶的酶解不遵循Mchaelis-M∞ten機(jī)制；水解過程中復(fù)合酶酶解產(chǎn)物d[G]／dt的變化說明*淀粉酶能很好地協(xié)同糖化酶水解生淀粉，其效果不僅僅是兩者的簡單相加。關(guān)鍵詞：糖化酶；a一淀粉酶；協(xié)同作用；生淀粉根據(jù)作者的研究?，發(fā)現(xiàn)用具有生淀粉活性的糖化酶和”淀粉酶協(xié)同作用能很好

2、地形成多孔淀粉。其中人們對(duì)生淀粉糖化酶的作用機(jī)理已有了一定的了解。生淀粉糖化酶水解生淀粉與水解糊化淀粉的機(jī)理與方式有相同的地方，即都是從非還原末端外切淀粉的a一1，4一葡萄糖苷鍵和a．1，6、葡萄糖苷鍵，但也存在著很大的差別”J。生淀粉顆粒在水中由于其表面與水分子形成氫鍵，從而形成水束，生淀粉顆粒表面大量的水束形成了一層水分子無法通過的水束層。只有當(dāng)溫度升高時(shí)水束層被破壞，水分子滲人淀粉顆粒，使淀粉顆粒膨脹與糊化。人們稱之為“水束隔離模式(water-cIusterdlss。ciatingmod—e1)”。因此，酶是否能與生淀粉顆粒表面結(jié)合是水解生淀粉的關(guān)鍵”1。生淀粉*淀粉酶即*淀

3、粉酶，是內(nèi)切型淀粉酶，它作用于淀粉時(shí)是從淀粉分子的內(nèi)部任意切開a一1，4鍵，使淀粉分子迅速降解，失去了粘性以及和碘的呈色反應(yīng)，同時(shí)使水解物的還原力增加。雖然國外研究人員已經(jīng)將近50種不同來源的a一淀粉酶的肽鏈進(jìn)行了空間結(jié)構(gòu)、氨基酸序列分析，并將相應(yīng)的DNA序列破譯”J。但是對(duì)n一淀粉酶水解生淀粉的作用機(jī)理還不十分清楚，國內(nèi)外的報(bào)道很少。糖化酶和a靛粉酶復(fù)合水解生淀粉能形成多孔淀粉，但對(duì)其作用機(jī)理仍然不是十分清楚，很難用實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)來確切描述這一過程。本文試圖從一些側(cè)面對(duì)糖化酶和*淀粉酶復(fù)合水解淀粉形成多孔淀粉的機(jī)理作一些探索，考察單個(gè)糖化酶、單個(gè)*淀粉酶以江蘇省基礎(chǔ)研究計(jì)劃(自然科學(xué)基金

4、)資助項(xiàng)目(編號(hào)：BK200340】)。作者簡介：姚衛(wèi)蓉‘1970～’·女，副教授。E圳11：”“”㈣ng?！?鬯3穢及兩者的復(fù)合形式分別作用生淀粉的情況，希望從動(dòng)力學(xué)機(jī)制上解釋酶解機(jī)理。l材料與方法1．1材料黑曲霉糖化酶：購自Sigma公司，酶活6000U／mL，在pH4．5，55℃條件下3min由淀粉釋放1Onlg葡萄糖為lu；桿菌*淀粉酶：購自Sigma公司，酶活51U／rng，在pH69，20℃3min由淀粉釋放1．OH培麥芽糖為1u；土豆淀粉：荷蘭產(chǎn)風(fēng)車牌。1．2單酶或復(fù)合酶酶解反應(yīng)分別取不同量或不同配比的糖化酶、*淀粉酶加入到不同底物濃度的10mL反應(yīng)液中，42℃下反應(yīng)不

5、同時(shí)間，加4％的NaOH溶液1mL終止反應(yīng)，用NeIson—Somogyi方法”161測定反應(yīng)液中還原糖的濃度。1．3復(fù)合酶酶解的d[G]／dt．t曲線用本文附件“Mathematical源程序”，分析復(fù)合酶酶解反應(yīng)，對(duì)葡萄糖濃度變化數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，得到復(fù)合酶酶解產(chǎn)物葡萄糖濃度隨時(shí)間的變化規(guī)律(d[GJ／dt．t)。2結(jié)果與討論在本研究中利用生淀粉糖化酶作用生淀粉制備多孔淀粉時(shí)，使用了a一淀粉酶一起作用，水解能力得到了提高，多孔淀粉的性能也得到了提高?。a一淀粉酶的協(xié)同作用是如何體現(xiàn)的呢?下面試圖從酶解萬方數(shù)據(jù)第4期I業(yè)微生物第35卷動(dòng)力學(xué)方面闡述“一淀粉酶與糖化酶的協(xié)同作用。分別考察

6、單一糖化酶、單一a。淀粉酶以及兩者的復(fù)合形式作用生淀粉的情況。由于制備多孔淀粉時(shí)一直用工業(yè)酶制劑，而研究酶解機(jī)理必須用純酶。因此，選用了與所用工業(yè)酶制劑同一菌種所產(chǎn)的純酶進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。文獻(xiàn)報(bào)道”J，生淀粉酶水解生土豆淀粉的水解度最低，反應(yīng)速度最慢，能很好地呈現(xiàn)酶解初期的動(dòng)力學(xué)。因此，決定選用土豆淀粉作為酶解底物。2．I糖化酶的MichaeIis．Meten常數(shù)由于本研究所用復(fù)合酶主要為糖化酶，在研究復(fù)合酶酶解時(shí)，首先要考察糖化酶水解動(dòng)力學(xué)機(jī)制。用10u的糖化酶分別水解不同濃度土豆淀粉(5至50mdmL)，以葡萄糖為指標(biāo)測定水解速度，并以Lineweav“一Burk方式作圖(即以1／V對(duì)1

7、／[S]作圖)，結(jié)果見圖1。圖1單一糖化酶的Lineweaver—Burk圖(10U糖化酶)由圖1可知，糖化酶水解生土豆淀粉的1／V與l／[Sj成一直線，符合MichaebMeten方程陋7，該方程的表達(dá)式為：107／v=63．69／rS]一O428(1)根據(jù)MichaeIjs—Meten方程，該直線在x、y軸上的截距分別為一1／K。，1／vn．，根據(jù)方程(1)可得糖化酶的Mlchaelis—Meten常數(shù)K。，、V?經(jīng)計(jì)算：K。。=14864(mg／mL