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《苯酚降解菌的富集篩選及其降解條件研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在工程資料-天天文庫。
1、微生物技術大實驗期末論文報告苯酚降解菌的富集篩選及其降解條件研究摘要：［目的］從煉油廠的活性污泥中分離高效苯酚降解菌，對其進行形態(tài)學鑒定，并研究其特性，為含酚廢水的處理及環(huán)保工程菌株構建奠定基礎，具有一定的理論和實際應用價值。［方法］從南京金陵石化煉油廠的活性污泥中篩選、馴化得到1株高效苯酚降解菌株P4。通過形態(tài)學對其進行鑒定。最后，對P4的苯酚降解特性進行研究。［結果］P4為革蘭氏陰性球菌，最適降解苯酚的溫度為28℃，最適pH為5.5;36h內對300mg/L的無機培養(yǎng)液苯酚降解率達到56.6%。［結論］
2、P4具有較強的適應能力和苯酚降解能力，可用于高濃度含酚廢水的生物處理，有較高的研究及應用前景。關鍵詞:苯酚降解菌;篩選;馴化;最佳降解條件苯酚是有機合成的重要原料，是造紙、煉焦、煉油、塑料、農藥和醫(yī)藥合成等行業(yè)生產的原料或中間體[1]，大量用于制造酚醛樹脂以及其他高分子材料、藥物、燃料和炸藥等。隨著樹脂、化工和高分子材料等企業(yè)對苯酚需求量的日益增加，各企業(yè)所排放的含苯酚廢水量也日益增加[2]。由于苯酚是一種原型質毒物，具有很強的毒性，對生態(tài)環(huán)境和人體健康構成巨大威脅[3,4]。在許多國家，苯酚已被環(huán)保部門列
3、入優(yōu)先控制污染物的黑名單之中[5,6]。結合國標GB8978-1996的實施，有關工作人員將每升1000毫克以上的含酚廢水進行回收處理；每升1000毫克以下的含酚廢水濃縮后回收處理；每升300毫克以下的含酚廢水才允許采用某種方法清除廢水中苯酚，處理達標后排放。清除工業(yè)廢水中苯酚的方法主要分為三大類：物理處理方法、高級氧化處理技術、生物治理方法。常用的物理處理方法包括吸附法、溶劑萃取法、膜萃取技術和膜蒸餾技術等；常用的高級氧化處理技術包括濕式催化氧化技術、光催化氧化技術和電催化氧化技術等；常用的生物治理方法包
4、括活性污泥法、酶處理技術和固定化微生物技術等[7]。其中利用微生物降解苯酚不僅處理效率高、二次污染少，而且成本低廉、簡單方便，因此生物降解法成為經濟效益和環(huán)境效益俱佳的苯酚清除方法[8]。在已有研究的基礎上，本實驗小組從南京金陵石化煉油廠中取得處理含酚廢水的活性污泥，分離篩選出一株對苯酚具有高效降解能力的菌株，并對其進行了形態(tài)學和降解特性的研究，以期為含酚廢水的處理及環(huán)保工程菌株構建奠定基礎，具有重要的理論和實際應用價值。8微生物技術大實驗期末論文報告1材料與方法1.1材料1.1.1菌株菌株來源于南京金陵石
5、化煉油廠的活性污泥。1.1.2培養(yǎng)基[9]（1）無機鹽培養(yǎng)液:MgSO490mg，CaCl20.8mg，MnSO40.9mg，K2HPO4400mg，FeCl36mg，NH4NO3600mg，溶解后加蒸餾水定容至1L，調節(jié)pH至7.0，121℃高壓蒸汽滅菌20min。（2）富集培養(yǎng)基:牛肉浸膏5g,蛋白胨10g,氯化鈉5g,瓊脂18g,溶解后加蒸餾水定容至1L,苯酚1000mg/L，pH7.4~7.6，121℃高壓蒸汽滅菌20min。（3）瓊脂平板(分離培養(yǎng)基):在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的基礎上加入不同濃度的苯
6、酚。（4）斜面培養(yǎng)基(保存培養(yǎng)基):牛肉浸膏5g,蛋白胨10g,氯化鈉5g,瓊脂18g,溶解后加蒸餾水定容至1L，pH7.4~7.6，121℃高壓蒸汽滅菌20min。1.1.3試劑和溶液酚標準液，2%4-氨基安替比林溶液，8%鐵氰化鉀溶液，氯仿，20%氨性氯化銨緩沖液。1.1.4主要儀器顯微鏡、721紫外分光光度計、搖床恒溫培養(yǎng)箱、大容量高壓滅菌鍋、超凈工作臺等。1.2方法1.2.1苯酚降解菌的篩選馴化富集培養(yǎng)：將新鮮的活性污泥在空氣中曝氣24h,使其中微生物處于內源代謝階段。取樣品1g加入含100mL液體
7、富集培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，在220r/min、30℃搖床培養(yǎng)24h。篩選馴化[10]：采用逐級馴化方法。取污泥1g接入含苯酚500mg/L100mL的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中（做三個樣）,220r/min、30℃搖床培養(yǎng)72h后，取1mL馴化的菌液于1000mg/L的無機鹽培養(yǎng)基中馴化。分離純化[10][11]8微生物技術大實驗期末論文報告：采用梯度平板法分離。配制苯酚濃度為300mg/L、500mg/L、800mg/L、1000mg/L、1200mg/L作為惟一碳源的固體培養(yǎng)基。然后將純化得到菌株分
8、別劃線培養(yǎng)在這5個梯度的培養(yǎng)基上。在30℃的生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。從中篩選出耐受苯酚能力最強的菌株。分別以無菌操作瓊脂平板劃線分離,每個樣瓶劃兩個平板,置30℃電熱恒溫箱中培養(yǎng)48h后,挑取單一菌落在斜面上純化，接種于牛肉膏斜面上,同一條件繼續(xù)培養(yǎng)48h后,4℃冰箱保存。1.2.2菌種的觀察與鑒別觀察并記錄微生物的生長狀況、個體形態(tài)特征、菌落特征，對菌株進行革蘭氏染色。1.2.3苯酚含量的測定[12]用無酚蒸餾
