《其他類型的ELISA》PPT課件

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1、其他類型的ELISA1.阻斷ELISA本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現(xiàn)已成為豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬偽狂犬病（PR）及豬胸膜肺炎（AP）的主要檢測方法。以AP2型抗體的阻斷ELISA檢測法為例介紹其操作程序：(1)100μlAP2型工作量抗原包被→4℃過夜，洗滌三次、拋干。(2)用200μl阻斷緩沖液進行封閉→37℃60分鐘，洗滌三次、拋干。(3)加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl→37℃60分鐘，洗滌三次、拋干。(4)加100μl工作量兔抗AP2型血清→37℃30分鐘，洗滌三次、拋干。(5)加100μl工作量豬抗兔

2、IgG-HRP→37℃60分鐘，洗滌三次、拋干。(6)加100μlOPD底物液→37℃20分鐘，加終止液。(7)用ELISA檢測儀測定OD值。試驗中同時設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陰、陽性血清對照、兔抗AP2型陽性對照、空白對照。（2）抗體捕捉ELISA本法主要用于檢測IgM抗體。由于IgM抗體出現(xiàn)于感染早期，所以檢測出IgM，則可作為某種疾病的早期診斷。抗體捕捉ELISA根據(jù)所用標(biāo)記方式不同可分為標(biāo)記抗原、標(biāo)記抗體、標(biāo)記抗抗體捕捉ELISA等幾種，其中以標(biāo)記抗原捕捉ELISA比較有代表性，IgM抗體捕捉酶聯(lián)免疫吸附試驗(IgMantibodycapt

3、ureELISA，簡稱MAC-ELISA)或反向間接ELISA法是利用抗人Igm(μ鏈特異性)抗體包被固相載體，作為“捕捉抗體”吸附待檢血清中的Igu。經(jīng)過洗滌除去血清中IgC及其他成分，再加入特異性抗原與“捕捉”到的相應(yīng)IgM抗體結(jié)合；然后加入酶標(biāo)抗體和底物顯色進行測定。該方法的主要程序為：①用抗u鏈（抗IgM重鏈）抗體包被→37℃60分鐘后置4℃過夜，洗滌三次、拋干②加待檢血清→37℃2小時，洗滌三次、拋干③加酶標(biāo)抗原→37℃60分鐘，洗滌三次、拋干④加底物液→37℃20分鐘，加終止液⑤用ELISA檢測儀測定OD值。(3)布E

4、LISA（C－ELISA）C－ELISA（Cloth-ELISA）是加拿大學(xué)者Blais,B.W.等于1989年建立的一種新型免疫檢測技術(shù)。該方法是以疏水性聚脂布（HydrophobicPolyesterCloth）即滌綸布為固相載體，這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大，可為免疫反應(yīng)提供較大的表面積，提高反應(yīng)的敏感性，且容易洗滌，不需特殊儀器等優(yōu)點。其基本原理與Dot-ELISA類似，只是載體不同。以對布氏桿菌抗原的檢測為例，C－ELISA的主要程序為：(1)首先把抗布氏桿菌的血清包被（吸附）在聚脂布上，并經(jīng)洗滌及封閉；(2)加

5、被檢樣品并于室溫下感作30分鐘，然后洗5次；(3)加酶標(biāo)記的抗布氏桿菌抗體，于室溫下感作30分鐘，然后洗滌5次；(4)加入底物液顯色；(5)測定OD值。