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1、本章內(nèi)容:第一節(jié),微生物的營養(yǎng)要求(微生物們需要吃什么?)第三節(jié),發(fā)酵生產(chǎn)中培養(yǎng)條件的確定(怎樣讓微生物健康的工作?)第二節(jié),培養(yǎng)基(如何給微生物們做飯?)第三章發(fā)酵工藝條件的確定第一節(jié)微生物的營養(yǎng)要求一、微生物細胞的化學(xué)組成微生物細胞水:70%-90%干物質(zhì)有機物蛋白質(zhì)、糖、脂、核酸、維生素等及其降解產(chǎn)物無機物(鹽)細胞化學(xué)元素組成:主要元素:碳、氫、氧、氮、磷、硫、鉀、鎂、鈣、鐵等;微量元素:鋅、錳、鈉、氯、鉬、硒、鈷、銅、鎢、鎳、硼等。微生物生長需要六大營養(yǎng)要素:碳源、氮源、無機鹽、能源、生
2、長因子、水二、營養(yǎng)物質(zhì)第一節(jié)微生物的營養(yǎng)要求微生物生長所需要的六大營養(yǎng)物質(zhì)及其生理功能第二節(jié)培養(yǎng)基培養(yǎng)基幾乎是一切對微生物進行研究和利用工作的基礎(chǔ)培養(yǎng)基:是用于維持微生物生長繁殖和產(chǎn)物形成的營養(yǎng)物質(zhì)。任何培養(yǎng)基都應(yīng)該具備微生物生長所需要六大營養(yǎng)要素:任何培養(yǎng)基一旦配成,必須立即進行滅菌處理;常規(guī)高壓蒸汽滅:1.05kg/cm2,121.3℃15-30min;某些成分進行分別滅菌:過濾除菌;第二節(jié)培養(yǎng)基一、選用和設(shè)計培養(yǎng)基的原則和方法在微生物學(xué)研究和生長實踐中,配置合適的培養(yǎng)基是一項最基本的要求。原
3、則:1、目的明確2、營養(yǎng)協(xié)調(diào)3、理化適宜4、經(jīng)濟節(jié)約1、目的明確培養(yǎng)何菌?獲何產(chǎn)物?實驗室研究或生產(chǎn)大批產(chǎn)品用?生產(chǎn)含氮高或低產(chǎn)物?種子培養(yǎng)基或發(fā)酵培養(yǎng)基?目的不同 方案不同一、選用和設(shè)計培養(yǎng)基的原則和方法2、營養(yǎng)協(xié)調(diào)(1)選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì)實驗室一般培養(yǎng):普通常用培養(yǎng)基;遺傳研究:成分清楚的合成培養(yǎng)基;生理、代謝研究:選用有利于代謝的培養(yǎng)基;例如枯草芽孢桿菌:一般培養(yǎng):肉湯培養(yǎng)基或LB培養(yǎng)基;自然轉(zhuǎn)化:基礎(chǔ)培養(yǎng)基;觀察芽孢:逆境培養(yǎng)基;產(chǎn)蛋白酶:以玉米粉、黃豆餅粉為主的產(chǎn)酶培養(yǎng)基;一、選用和設(shè)計
4、培養(yǎng)基的原則和方法(2)營養(yǎng)物質(zhì)濃度及配比合適營養(yǎng)物質(zhì)的濃度適宜;營養(yǎng)物質(zhì)之間的配比適宜;高濃度糖類物質(zhì)、無機鹽、重金屬離子等不僅不能維持和促進微生物的生長,反而起到抑制或殺菌作用。培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)之間的配比直接影響微生物的生長繁殖和代謝產(chǎn)物的形成和積累,其中碳氮比(C/N)的影響較大。發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸時:碳氮比為4/1時,菌體大量繁殖,谷氨酸積累少;碳氮比為3/1時,菌體繁殖受到抑制,谷氨酸產(chǎn)量則大量積累。1.斜面培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基主要是用于:1)生長繁殖培養(yǎng)基,包括細菌、酵母等的斜面培養(yǎng)基以及霉菌
5、、放線菌生孢子培養(yǎng)基或麩皮培養(yǎng)基等。2)菌種保藏培養(yǎng)基;工業(yè)發(fā)酵中,培養(yǎng)基往往是依據(jù)生產(chǎn)流程和作用分:斜面培養(yǎng)基種子培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)基2.種子培養(yǎng)基包括:搖瓶種子和小罐種子培養(yǎng)基。目的:培養(yǎng)種子1.促進生長,增加細胞數(shù)量使其大量繁殖;2.必須培養(yǎng)出強壯、健康、活性強的“種子”。種子培養(yǎng)基滿足2特點:1.必須有較完全和豐富的營養(yǎng)物質(zhì),特別需要充足的氮源和生長因子。2.成分應(yīng)與發(fā)酵培養(yǎng)基的主要成分相近。3.發(fā)酵培養(yǎng)基地位:發(fā)酵生產(chǎn)中最主要的培養(yǎng)基,不僅采用大量原材料,也是生產(chǎn)能否成功的關(guān)鍵。作用:最大限
6、度的獲得目的產(chǎn)物,因此必需根據(jù)菌體的生長規(guī)律和產(chǎn)物合成特點設(shè)計培養(yǎng)基。發(fā)酵培養(yǎng)基的共性單位培養(yǎng)基能夠產(chǎn)出最大量的目的產(chǎn)物;能夠使得目的產(chǎn)物合成速率最大;使副產(chǎn)物合成量最少;采用的培養(yǎng)基應(yīng)該質(zhì)量穩(wěn)定、價格低廉、易于獲得;不影響攪拌性能和發(fā)酵產(chǎn)物后處理。3.發(fā)酵培養(yǎng)基設(shè)計原則1.提供必要的營養(yǎng)成分;2.利于減少培養(yǎng)基原料單耗,提高單位營養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)化率。3.利于提高產(chǎn)物濃度,以提高單位容積的生產(chǎn)能力。4.利于提高產(chǎn)物合成速度,縮短發(fā)酵周期。5.減少副產(chǎn)物的形成,便于分離純化。6.原料價格低廉。7.原料盡
7、量不對攪拌和通氣產(chǎn)生影響,利于O2的利用率8.利于產(chǎn)品的分離純化,盡量減少產(chǎn)生“三廢”物質(zhì)。注意代謝調(diào)節(jié)物的影響:有些物質(zhì)存在于培養(yǎng)基中往往能明顯地促進或抑制發(fā)酵產(chǎn)物的形成。1)前體物質(zhì);2)誘導(dǎo)劑;3)阻遏物或抑制劑4)金屬離子(1)前體物質(zhì)前體:是指某些化合物添加到發(fā)酵培養(yǎng)基中,能直接在生物合成過程中結(jié)合到產(chǎn)物中去,而其自身的結(jié)構(gòu)未發(fā)生太大變化,卻能夠提高產(chǎn)物產(chǎn)量的一類物質(zhì)。在發(fā)酵中添加少量的前體物質(zhì)將有利于產(chǎn)物的合成和顯著提高產(chǎn)量,但濃度過大起抑制作用。青霉素:分子量356苯乙酸:分子量13
8、6(2)添加促進劑(誘導(dǎo)物)工業(yè)用微生物酶多數(shù)為誘導(dǎo)酶,如蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶等。誘導(dǎo)物的存在能大大強化誘導(dǎo)酶的生物合成。酶的正常底物或底物類似物都可作為誘導(dǎo)物。在各種微生物酶的發(fā)酵培養(yǎng)基中必須加入誘導(dǎo)物,例如淀粉、糊精或麥芽糖是淀粉酶或糖化酶的誘導(dǎo)物。只有添加這些物質(zhì)的培養(yǎng)基,才能獲得高產(chǎn)。(1)添加前體物質(zhì)添加前體物質(zhì)方法:流加法前體一般都有毒性,濃度過大對菌體的生長不利,一般基礎(chǔ)料中僅僅添加0.07%,前體相對價格較高,添加過多,容易引起揮發(fā)和氧化,用量不要大于0.1%。