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《雞新城疫血凝(HA)及血凝抑制(H1)試驗》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、雞新城疫血凝（HA）及血凝抑制(H1)試驗（一）目的意義：1.掌握血凝試驗（HA）與血凝抑制試驗（HAI）的基本方法；2.了解HA與HI在新城疫病毒及其它病毒診斷和鑒定中的應(yīng)用。(二)基本原理：許多病毒表面具血凝素，具有凝集某些動物或人紅細(xì)胞的特性，稱為血凝現(xiàn)象，可用于鑒定病毒。血凝現(xiàn)象可以被特異性抗體所抑制，稱為血凝抑制現(xiàn)象，利用這種特性可進行血清學(xué)試驗，稱為血凝抑制試驗。（三）器材及試劑:待檢病毒:雞新城疫病毒雞胚尿囊液；待檢血清：抗雞新城疫病病毒陽性血清；生理鹽水、1%雞紅細(xì)胞、96孔V形微量血凝
2、板、加樣器等。（四）實驗步驟：一、血凝試驗（HA）取96孔板，按以下步驟操作：1、第一排1-12孔各加生理鹽水50ul，第二排1-12孔加生理鹽水50ul為紅細(xì)胞對照；2、吸50ul病毒液于第一排第1孔，混勻后取50ul至第2孔，依次稀釋至第12孔，棄去50ul，各孔經(jīng)倍比稀釋后稀釋度依次為2-1~2-12。3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%雞紅細(xì)胞50ul，微型震蕩器震蕩2min混勻。4、室溫靜置10-30分，觀察結(jié)果（見下表）。孔號滴度材料123456789101112123456789
3、1011對照PBS（ml）0.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.25↓↘↓↘↓↘↓↘↓↘↓↘↓↘↓↘↓↘↓↘↓↘↓↘1:5稀釋抗原（ml）0.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.251%雞紅細(xì)胞懸浮液（ml）0.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.25作用時間及溫度37℃靜置40分鐘5、結(jié)果判定：紅細(xì)胞對照組紅細(xì)胞完全沉降，以試驗排中能使等量紅細(xì)胞
4、發(fā)生完全凝集的病毒最高稀釋倍數(shù)，作為病毒的血凝價，即HI效價，用2n表示。二、血凝抑制試驗（HI）取一96孔板，按以下步驟操作：1、4個單位抗原的制備：按HA試驗測出的病毒血凝價除以4即為4個單位血凝素的稀釋度。2、待檢血清的稀釋：第一、二、三排1-12孔各加生理鹽水50ul，于第一排第1孔中加入50ul待檢血清，反復(fù)吹吸3-5次混勻后，取50ul至第2孔混勻，吸取50ul至第3孔，依次稀釋至第12孔，棄去50ul，經(jīng)倍比稀釋，血清的稀釋倍數(shù)為21~212。3、第一、二排1-12孔各加4個單位血凝素50
5、ul，微量震蕩器震蕩2min混勻；4、室溫靜置20min；5、第一、二、三排1-12孔各加1%雞紅細(xì)胞50ul，微量震蕩器震蕩2min混勻混勻。6、室溫靜置10-30分，觀察結(jié)果（見下表）；孔號滴度材料12345678910111212345678910病毒對照血清對照PBS（ml）0.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.25↓↘↓↘↓↘↓↘↓↘↓↘↓↘↓↘↓↘↓↘↓↘↓↘陽性血清（ml）0.250.250.250.250.250.250.250.25
6、0.250.25棄去0.254單位病毒（ml）0.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.25作用時間及溫度37℃靜置30分鐘1%雞紅細(xì)胞懸浮液（ml）0.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.250.25作用時間及溫度37℃靜置30-40分鐘7、結(jié)果判定：第二排為抗原對照，紅細(xì)胞應(yīng)全部凝集，第三排為紅細(xì)胞對照，紅細(xì)胞應(yīng)全部沉降。以待檢血清能完全抑制病毒凝集紅細(xì)胞的最高稀釋倍數(shù)為血清的HAI效價，用2n表示。通常能使4個凝
7、集單位病毒凝集紅細(xì)胞的作用完全被抑制的血清最高稀釋倍數(shù)，稱為抗體的血凝抑制價（HI效價）。只有陰性對照孔血清滴度不大于21g2，陽性對照孔血清誤差不超過1個滴度，試驗結(jié)果才有效。
