中藥“龍泉復(fù)方”制劑有效部位群抑制腫瘤作用的機(jī)制研究

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1、中南民族大學(xué)碩士學(xué)位論文中藥“龍泉復(fù)方”制劑有效部位群抑制腫瘤作用的機(jī)制研究姓名：鄧志芳申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：張惟杰;李勁2011-05-27摘要本研究旨在探詢?nèi)嘶|(zhì)金屬蛋白酶3（MatrixMetalloproteinase3，MMP3）基因單核苷酸多態(tài)性與食管鱗癌易感性的關(guān)聯(lián)關(guān)系。選擇MMP3基因上游轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)—774位的rs522616(A/G)，—1380位的rs632478(A/C)，—1552位的rs494963(T/G)，3個SNP位點(diǎn)為研究對象。利用蛋白酶K法提取外周血基因組DNA；采用PCR-RFLP的方法對外周血標(biāo)本各個

2、位點(diǎn)進(jìn)行基因分型，分別對河南食管癌散發(fā)病例、湖北食管癌散發(fā)病例以及兩地正常人、河南高發(fā)區(qū)移民的不同人群組合做病例-對照分析。運(yùn)用SPSS軟件對基因分型結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。（1）位于—774的rs522616（A/G）等位基因有GG、GA、AA三種分型，湖北正常人群與河南散發(fā)人群在GG基因型頻率上有差異（0.01

3、與河南散發(fā)患者在AG基因型頻率上有差異（0.01

4、3基因上游轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)rs522616、rs632478、rs494963的單核苷多態(tài)性與人群食管鱗癌的遺傳易感性有明顯相關(guān)。關(guān)鍵詞：MMP3；轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)；單核苷酸多態(tài)性；食管鱗癌；遺傳易感關(guān)聯(lián)分析；中南民族大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要探尋中藥“龍泉復(fù)方”對不同腫瘤細(xì)胞作用的最適配伍及其用藥濃度。通過MTT(四甲基偶氮唑鹽)法繪制細(xì)胞增殖曲線觀察藥物對肝癌細(xì)胞系HepG-2和食管鱗癌細(xì)胞系EC-1、EC-109細(xì)胞增殖的影響，用熒光染色法進(jìn)一步確定“龍泉復(fù)方”有效成分誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的較佳配伍及其有效作用濃度范圍。結(jié)果表明：能抑制HepG-2細(xì)胞增殖的有效作用范圍的七味單方(分別是馬錢

5、子、山慈菇、喜樹果、龍葵、石上柏、青黛、紫菀)浸膏混合物的濃度范圍是500~1000μg/ml，然而，在125~250μg/ml之間卻促進(jìn)細(xì)胞增殖，龍葵和七味藥物復(fù)方總浸膏作用范圍為<1000μg/ml；對抑制EC-1細(xì)胞而言在濃度范圍內(nèi)均對細(xì)胞有抑制作用，三味藥物混合浸膏(馬錢子，喜樹果、青黛提取的浸膏的混合物)<50μg/ml和150~400μg/ml有明顯效果，七味藥物復(fù)方總浸膏<25μg/ml和50~200μg/ml有明顯效果，喜樹果單方浸膏有效范圍為25μg/ml和50~200μg/ml之間；3種浸膏促進(jìn)EC-1細(xì)胞增殖的濃度范圍依次為：50~100μg/ml，

6、25~50μg/ml和25~50μg/ml；對于EC-109細(xì)胞而言在濃度范圍內(nèi)均對細(xì)胞有抑制作用，龍葵、山慈菇和馬錢子對細(xì)胞的明顯抑制濃度分別為：15~100μg/ml、25~50μg/ml和<50μg/ml；通過對EC-1熒光染色的觀察發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的有效作用濃度范圍分別為：七位單方浸膏混合物為5~10μg/ml，三味藥復(fù)方混合浸膏為10~25μg/ml，喜樹果約50μg/ml；通過對凋亡蛋白Caspase-3的檢測表明不同的藥物濃度下細(xì)胞蛋白的表達(dá)量不同，并在一定的區(qū)間內(nèi)呈現(xiàn)線性關(guān)系。上述配伍在所示用藥濃度范圍對癌細(xì)胞增殖有明顯抑制作用，但對于不同的癌癥細(xì)胞系，其

7、較佳作用的復(fù)方配伍和濃度也不盡相同，個別藥物濃度甚至作用相反。研究結(jié)果提示，在臨床中應(yīng)根據(jù)具體情況調(diào)整，使得用藥少效果佳。關(guān)鍵詞龍泉復(fù)方;配伍;藥物濃度;腫瘤細(xì)胞;MTT(四甲基偶氮唑鹽)法;AO/EB染色法0AbstractToinvestigatethegeneticassociationbetweensinglenucleotidepolymorphismofmatrixmetalloproteinase3geneandesophagealcancersusceptibility,threeSNPswithinupstr