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1、第二節(jié)基因突變及菌種選育1一、基因、基因符號(hào)以及有關(guān)術(shù)語(yǔ)1、基因是合成一條多肽或RNA所必需的完整的核酸序列。2、基因組、基因型是指生物單倍體細(xì)胞所有基因?;蚪M側(cè)重“全部堿基對(duì)序列的組成”;基因型(genotype)是生物基因體現(xiàn)的功能、特性,側(cè)重“某個(gè)基因”。23、基因符號(hào)常以說(shuō)明某個(gè)基因功能特性的英文的前3個(gè)字母表示,一般用小寫斜體,該基因的功能特性在右上角以+/-、r/s表示。組氨酸基因用his(histidine的前3個(gè)字母)表示,his-表示組氨酸缺陷型;gal+、gal-分別表示能發(fā)
2、酵半乳糖(galactose)和不能發(fā)酵半乳糖;strs、strr分別表示對(duì)鏈霉素(streptomucin)敏感和具抗性?;蜃?genelocus)指各個(gè)基因在染色體上特定的位置。34、性狀是構(gòu)成一個(gè)生物個(gè)體的有關(guān)結(jié)構(gòu)、形態(tài)、物質(zhì)和功能等各方面特征的總稱。5、表型指微生物在特定條件下表現(xiàn)出來(lái)的某種生物學(xué)特性。4二、基因突變(一)基因突變的術(shù)語(yǔ)突變(mutation)DNA或RNA中核苷酸序列發(fā)生了穩(wěn)定可遺傳的變化,導(dǎo)致微生物性狀發(fā)生改變?;蛲蛔儯c(diǎn)突變)DNA鏈上一對(duì)或少數(shù)幾對(duì)堿基發(fā)生改變
3、。染色體畸變DNA的大片段變化(插入,缺失,重復(fù),易位、倒位等)5野生型菌株與突變型菌株野生型菌株,從自然界分離到的任何微生物在其發(fā)生突變前的原始菌株。突變型菌株,野生型菌株經(jīng)突變后,性狀改變的菌株。正向突變與回復(fù)突變正向突變突變型菌株回復(fù)突變回復(fù)突變,野生型菌株經(jīng)突變成為突變型菌株以后,經(jīng)再一次突變,有時(shí)突變型菌株又恢復(fù)為野生型菌株原有的性狀,則這次的突變被稱為回復(fù)突變。野生型菌株(或野生型菌株的表型)6自發(fā)突變與誘發(fā)突變自發(fā)突變,自然條件下發(fā)生的突變。誘發(fā)突變,用各種人工因素處理細(xì)胞,突變率大
4、大增加,這種突變稱為誘變。誘變劑,如紫外線、亞硝酸等。突變率,在生長(zhǎng)的微生物群體中,每一細(xì)胞的某一性狀在每一世代中獨(dú)立發(fā)生突變的機(jī)率。一般也可簡(jiǎn)單地用每單位群體在繁殖一代過(guò)程中所形成的突變細(xì)胞平均數(shù)來(lái)表示。71、形態(tài)突變(1)細(xì)胞形態(tài)—鞭毛,芽孢,莢膜有無(wú),L型細(xì)菌。(2)菌落形態(tài)—大小,光滑和粗糙,顏色等,孢子顏色。一般為非遺傳型的表型變異,肺炎球菌失去莢膜:S→R變形桿菌:2%瓊脂,長(zhǎng)鞭毛,薄膜狀菌落;6%瓊脂或0.1%碳酸形成單個(gè)生長(zhǎng)的菌落。(二)突變的類型(根據(jù)突變體表型來(lái)分)82、致死突
5、變(1)基因突變導(dǎo)致個(gè)體死亡(2)條件致死型e.g.溫度敏感突變型—E.coli37℃生長(zhǎng),42℃下不生長(zhǎng),主要是突變引起了某些重要蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的改變。93、抗性突變型(1)抗藥性(耐藥性),可作為選擇性標(biāo)記。(2)抗噬菌體。4、抗原突變型抗原成分(eg.cellwall,鞭毛,莢膜,病毒表面蛋白等)的變異。5、產(chǎn)量突變型通過(guò)基因突變而產(chǎn)生的在代謝產(chǎn)物產(chǎn)量上明顯有別于原始菌株的突變株。如產(chǎn)量顯著高于原始菌株者為正變株,反之為負(fù)變株。106、營(yíng)養(yǎng)缺陷型(auxotroph)由于基因突變,而喪失合
6、成一種或幾種生長(zhǎng)因子的能力,必須在培養(yǎng)基中添加相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)成分才能正常生長(zhǎng)繁殖的突變型。(e.g.AA,vitamin)野生型(wildtype):從自然界分離到的任何微生物在其發(fā)生營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變前的原始菌株。原養(yǎng)型(prototroph):一般指營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株經(jīng)回變或重組后產(chǎn)生的菌株,其營(yíng)養(yǎng)要求在表型上與野生型相同。11基本培養(yǎng)基(MM)——能夠滿足野生型菌株生長(zhǎng)最低限度需要的培養(yǎng)基。補(bǔ)充培養(yǎng)基(SM)——凡能滿足相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)缺陷型生長(zhǎng)需要的培養(yǎng)基。在MM中加蛋白胨(多種氨基酸)便可以用來(lái)培養(yǎng)各種
7、氨基酸的缺陷型;加入酵母浸膏(其中含有多種B族維生素和核苷酸)便可以培養(yǎng)不同的維生素、嘌呤和嘧啶缺陷型。完全培養(yǎng)基(CM)——凡能滿足一切營(yíng)養(yǎng)缺陷型生長(zhǎng)需要的培養(yǎng)基。1213生物化學(xué)統(tǒng)一性法則:人和細(xì)菌在DNA的結(jié)構(gòu)及特性方面是一致的,能使微生物發(fā)生突變的誘變劑必然也會(huì)作用于人的DNA,使其發(fā)生突變,最后造成癌變或其他不良的后果?;瘜W(xué)藥劑對(duì)細(xì)菌的誘變率與其對(duì)動(dòng)物的致癌性成正比。超過(guò)95%的致癌物質(zhì)對(duì)微生物有誘變作用,90%以上的非致癌物質(zhì)對(duì)微生物沒(méi)有誘變作用。誘變劑的共性原則:(四)突變株的應(yīng)用—
8、—Ames試驗(yàn)(遺傳毒性試驗(yàn)之一)14美國(guó)加利福尼亞大學(xué)的BruceAmes教授于1975年發(fā)明,因此稱為Ames試驗(yàn)。原理:檢測(cè)鼠傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphmurium)組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株(his-)的回復(fù)突變率。1516證明Ames試驗(yàn)重要性的應(yīng)用實(shí)例:上世紀(jì)60-70年代,一種降低婦女妊娠反應(yīng)的藥物“反應(yīng)?!绷餍小5S后發(fā)現(xiàn)畸形兒的出生率明顯增高(海豹肢癥),而且生產(chǎn)畸形兒的婦女大多曾服用“反應(yīng)停”。采用Ames試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這種物質(zhì)的確具有很強(qiáng)的致突變作用,因此