《鼠單抗的改造》PPT課件

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1、1鼠單抗的改造2本章主要內(nèi)容概述C區(qū)的人源化--嵌合抗體V區(qū)的人源化--改型抗體小分子抗體3概述鼠源性單抗在臨床應(yīng)用中存在的問(wèn)題具免疫原性激發(fā)免疫應(yīng)答，消弱療效，產(chǎn)生副作用與FC片段相關(guān)的功能不能有效活化如活化補(bǔ)體，ADCC,調(diào)理作用半衰期短4概述鼠源性單抗的改造原則保持原來(lái)抗體的特異性與親和力；盡量減小其免疫原性。發(fā)展階段C區(qū)的人源化--嵌合抗體鼠抗V區(qū)與人抗C區(qū)組裝而成V區(qū)的人源化改型抗體小分子抗體5C區(qū)的人源化--嵌合抗體1984Morrison首次報(bào)道依據(jù)90%的人抗鼠抗體反應(yīng)針對(duì)鼠抗C區(qū)基本手段從雜交瘤中獲得鼠抗V區(qū)基因從人B細(xì)胞獲得人抗C區(qū)基因?qū)⒍呖寺〉奖磉_(dá)

2、載體轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞，進(jìn)行表達(dá)6C區(qū)的人源化--嵌合抗體主要形式嵌合IgG嵌合Fab嵌合F(ab’)27C區(qū)的人源化--嵌合抗體嵌合IgG目前構(gòu)建的大多數(shù)嵌合抗體均為鼠-人IgG如何構(gòu)建？鼠抗基因人抗基因VLCLVHCH1CH2CH3VLCLVHCH1CH2CH3VHCH1CH2CH3VLCL8C區(qū)的人源化--嵌合抗體嵌合IgG目前構(gòu)建的大多數(shù)嵌合抗體均為鼠-人IgG抗體基因的克隆鼠抗V區(qū)基因的獲得RT-PCR方法引物設(shè)計(jì)：依據(jù)VH和VL的組成--由4個(gè)相對(duì)保守的FR和3個(gè)CDR，設(shè)計(jì)（注意酶切位點(diǎn)）。9C區(qū)的人源化--嵌合抗體嵌合IgG目前構(gòu)建的大多數(shù)嵌合抗體均為鼠-人

3、IgG抗體基因的克隆鼠抗V區(qū)基因的獲得提取mRNA：從雜交瘤或脾細(xì)胞中獲得RT-PCR法克隆VH和VL基因10C區(qū)的人源化--嵌合抗體嵌合IgG目前構(gòu)建的大多數(shù)嵌合抗體均為鼠-人IgG抗體基因的克隆人抗C區(qū)基因的獲得C區(qū)的選擇：依據(jù)目的不同選擇C區(qū)—即抗體亞型，如補(bǔ)體活化能力，ADCC等IgG1的補(bǔ)體活化及ADCC作用強(qiáng)于IgG3，而IgG4沒(méi)有或很弱。與Fc受體結(jié)合力IgG1和IgG3最強(qiáng)IgG1和IgG4半衰期較長(zhǎng)11C區(qū)的人源化--嵌合抗體嵌合IgG目前構(gòu)建的大多數(shù)嵌合抗體均為鼠-人IgG抗體基因的克隆人抗C區(qū)基因的獲得引物設(shè)計(jì)：C區(qū)基因，設(shè)計(jì)時(shí)注意酶切位點(diǎn)提取mR

4、NA：從B細(xì)胞中獲得RT-PCR法克隆C區(qū)基因12C區(qū)的人源化--嵌合抗體嵌合IgG目前構(gòu)建的大多數(shù)嵌合抗體均為鼠-人IgG表達(dá)載體的構(gòu)建構(gòu)建嵌合L鏈與H鏈的重組質(zhì)粒注意必須是真核表達(dá)載體13C區(qū)的人源化--嵌合抗體嵌合IgG目前構(gòu)建的大多數(shù)嵌合抗體均為鼠-人IgG嵌合抗體的表達(dá)轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的選擇：骨髓瘤細(xì)胞，COS細(xì)胞，CHO細(xì)胞等。14幾種常用宿主細(xì)胞的表達(dá)特點(diǎn)COS細(xì)胞短暫表達(dá)較為理想，幾天內(nèi)即可裝配成功骨髓瘤細(xì)胞最主要的宿主細(xì)胞，如NS0CHO細(xì)胞常用宿主細(xì)胞，300-900mg/L15嵌合IgG優(yōu)點(diǎn)與不足優(yōu)點(diǎn)保留了鼠抗的特異性與親和力基本

5、解決鼠抗免疫原性所致的不良反應(yīng)能有效激活補(bǔ)體及ADCC延長(zhǎng)半衰期改善藥代動(dòng)力學(xué)特性16已批準(zhǔn)上市的治療性單抗2001淋巴瘤CD52人源化抗體Campath2000淋巴瘤CD33人源化抗體Mylotarg1998RSV感染RSVF蛋白人源化抗體Synagis1998乳腺癌HER-2人源化抗體Herceptin19981999炎癥性腸病類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎TNF-α人-鼠嵌合抗體Remicade1998移植排斥CD25人-鼠嵌合抗體Simulect1997淋巴瘤CD20人-鼠嵌合抗體Rituxan1997移植排斥CD25人源化抗體Zenapax1994冠心病血小板人-鼠嵌合FabRe

6、oPro1995大腸癌17-1A鼠單抗Panorex1986移植排斥CD3鼠單抗OKT3批準(zhǔn)日期適應(yīng)癥靶向抗原抗體種類(lèi)抗體名稱(chēng)17嵌合IgG優(yōu)點(diǎn)與不足不足仍具一定抗原性分子量較大，組織穿透能力較差清除較慢在導(dǎo)向診斷與治療方面受限18C區(qū)的人源化--嵌合抗體Fab和F(ab’)2嵌合抗體Fab克隆鼠抗V區(qū)基因克隆人抗CH1和Cκ基因重組構(gòu)建表達(dá)載體轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，表達(dá)嵌合抗體1920C區(qū)的人源化--嵌合抗體Fab和F(ab’)2嵌合抗體F(ab’)2化學(xué)偶聯(lián)法通過(guò)化學(xué)試劑將Fab連接成一個(gè)雙價(jià)抗體分子重組末端修飾法在Fab的C端額外連接一個(gè)Cys殘基：效率較低連接（CPP）3

7、，效率可達(dá)70%21C區(qū)的人源化--嵌合抗體Fab和F(ab’)2嵌合抗體優(yōu)點(diǎn)可原核表達(dá)包涵體：高效，可達(dá)30%，復(fù)性難分泌表達(dá)：周質(zhì)腔，可溶有活性，避免降解，降低毒性成功范例：抗CD3的Fab700mg/L人源化抗體HuMab4125-8Fab’2g/L22C區(qū)的人源化--嵌合抗體Fab和F(ab’)2嵌合抗體優(yōu)點(diǎn)可原核表達(dá)良好的藥物載體血液清除率高導(dǎo)向診斷與治療23C區(qū)的人源化--嵌合抗體Fab和F(ab’)2嵌合抗體缺點(diǎn)無(wú)ADCC,CDC滯留時(shí)間短仍具一定抗原性24V區(qū)的人源化嵌合抗體不能完全解決抗原性問(wèn)題V區(qū)的人源化—