實驗魚類急性毒性實驗

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1、魚類急性毒性實驗王寧實驗簡介魚類是水生食物鏈的頂級生物，也是水體中最為重要的經(jīng)濟動物。在污染水體中，當(dāng)污染物達到一定濃度時，就會引起魚類各種中毒反應(yīng)，例如行為失常，組織器官病變，生理功能紊亂乃至死亡。在人為控制條件下，進行各種魚類毒性實驗，不僅用于化學(xué)品毒性強度測定、水體污染程度、廢水及其處理效果檢查，而且也為制定水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)、評價環(huán)境質(zhì)量和管理廢水排放提供科學(xué)依據(jù)。因此，開展魚類急性毒性實驗的研究，對實驗結(jié)果給出正確合理的評價，對于我國水資源保護具有重要意義。實驗原理在規(guī)定條件下，使魚類接觸含不同濃度受試物

2、的水溶液，以96h為一實驗周期，在24h、48h、72h和96h時記錄實驗魚的死亡率，確定魚類死亡50%時的受試物濃度，半數(shù)致死濃度用24hLC50、48hLC50、72hLC50和96hLC50表示，并記錄無死亡的最大濃度和導(dǎo)致魚類全部死亡的最小實驗濃度。實驗材料1.實驗常用儀器設(shè)備溫度控制儀；（溶氧儀）pH試紙（分光光度計）玻璃水槽抄網(wǎng)：尼龍制，對照和實驗容器分用。實驗溶液的制備以重鉻酸鉀為實驗毒物，實驗溶液的母液由蒸餾水配制而成。母液最好每日配各1次，比較穩(wěn)定的物質(zhì)也可以兩日配制1次，配好后，最好低

3、溫保存。配制好的母液可以稀釋為進行毒性實驗的溶液，以等比或等對數(shù)間距設(shè)置濃度系列，相臨濃度比值不得超過2.2。實驗用魚的選擇實驗魚類一般選擇對污染物敏感，在生態(tài)類群中具有代表性，經(jīng)濟價值比較高，來源豐富、取材方便、遺傳穩(wěn)定，生物學(xué)背景資料豐富，大小適中，在室內(nèi)條件下易于飼養(yǎng)和繁殖的種類。斑馬魚是國際上通用的魚類急性毒性實驗魚種。建議的實驗溫度21-25℃，建議實驗魚的全長2.0士1cm。試驗方法與步驟1.實驗條件(1)實驗用水使用高質(zhì)量的自然水或標(biāo)準(zhǔn)稀釋水(見本節(jié)附錄)，也可以使用飲用水(必要時應(yīng)除氯〉。

4、水的總硬度為10-250mg/L(以CaCO3計)，pH為6.0-8.5。(2)實驗周期96h。(3)實驗負荷靜態(tài)實驗系統(tǒng)最大承載量為1.0g魚/L。(4)光照每天12-16h.(5)溫度與實驗魚種相適宜，變化范圍土2℃。(6)溶解氧不低于空氣飽和值的60%。曝氣時不能使受試物明顯受損。2.實驗方法正式實驗前必須對實驗用魚進行馴養(yǎng)，然后根據(jù)預(yù)實驗得出的結(jié)果(以上部分內(nèi)容可另行安排實驗時間)，在包括使魚全部死亡的最低濃度和96h魚類全部存活的最高濃度之間至少應(yīng)設(shè)置5個濃度組。每個實驗濃度組應(yīng)至少設(shè)3個平行系

5、列，每一系列設(shè)一個空白對照。如使用了助溶劑，應(yīng)增設(shè)溶劑驗量對照，其濃度與試液中的最高溶劑濃度相同。每一濃度組及對照組至少使用7尾魚。實驗前魚應(yīng)馴養(yǎng)。用水需曝氣。實驗分組：4組濃度系列：每組分別取0，35，70，140，280ml母液加入魚缸水中，充分混勻，則得到實驗濃度0，0.25，0.5，1，2g/L重鉻酸鉀（母液3L，50g/L重鉻酸鉀，每組600mL）高濃度用小魚缸，7L水，8條魚（大小均勻）?？瞻子么篝~缸，14L水，16條魚實驗控制溫度15°C。緩慢曝氣。2.實驗方法實驗溶液調(diào)節(jié)至相應(yīng)溫度后，從馴

6、養(yǎng)魚群中隨機取出魚并隨機迅速放入各實驗容器中。轉(zhuǎn)移期間處理不當(dāng)?shù)聂~均應(yīng)棄除。同一實驗，所有實驗用魚應(yīng)在30min內(nèi)分組完畢。實驗期間，不要對溶液強烈充氣，溶解氧含量應(yīng)高于空氣飽和值的60%。同時避免產(chǎn)生對魚類行為的干擾。實驗期間不投餌。在實驗開始后3h或6h觀察各處理組魚的狀況，并記錄實驗魚的異常行為〈如魚體側(cè)翻、失去平衡，游泳能力和呼吸功能減弱，色素沉積等〉。至少在24h、48h、72h和96h后檢查受試魚的狀況，并做記錄。如果受試魚沒有任何肉眼可見的運動，如鰓的扇動、碰觸尾柄后無反應(yīng)，即可判斷該魚已死

7、亡。觀察并記錄死魚數(shù)目后，將死魚從容器中取出。每天至少測定一次pH、溶解氧和溫度。實驗開始和結(jié)束時亦要測定。至少在實驗開始和結(jié)束時，測定實驗容器中實驗液的受試物濃度。pH：試紙（溶解氧：溶氧儀）溫度：溫度計（六價鉻：二苯碳酰二肼分光光度法）3.數(shù)據(jù)處理(1)在對數(shù)-概率坐標(biāo)紙上，繪制處理濃度對死亡率的曲線。用直線內(nèi)插法或常用統(tǒng)計程序計算出24h、48h、72h、96h的LC50值，并用標(biāo)準(zhǔn)方法計算95%的置信限。(2)如果實驗數(shù)據(jù)不適于用標(biāo)淮方法計算LC50，可用不引起死亡的最高濃度和引起100%死亡的最

8、低死亡濃度估算LC50的近似值，即這兩個濃度的幾何平均值。結(jié)果與評價目前，根據(jù)魚類急性毒性實驗的LCso值，評判毒物的危害等級，在國內(nèi)還沒有統(tǒng)一的規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)。1990年國家環(huán)保局的《環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范》中給出了污染物對魚類急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)，見表5-4。1994年，針對新化學(xué)品管理，國家環(huán)保局又制定了《新化學(xué)物質(zhì)危害評估準(zhǔn)則?，其中給出了新化學(xué)品對魚類急性毒性的危害分級標(biāo)準(zhǔn)，參見表5-5。根據(jù)下列標(biāo)準(zhǔn)，可以初步評判化學(xué)品或污染物的