《細胞信號轉到》PPT課件

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1、phcausesnon-autonomousovergrowthinmosaiceyes主要技術手段：★MARCM技術★TUNEL法MARCM技術如果想在嵌合體中敲除基因，用FLP/FRT系統(tǒng)如果想在嵌合體中增加基因表達，用UAS/Gal4系統(tǒng)UAS/Gal4系統(tǒng)GAL4/UAS系統(tǒng)是一種轉基因體系。原理：利用特定的啟動子或增強子，以組織特異性的方式激活酵母轉錄激活子GAL4的表達，GAL4又以同樣的方式引起GAL4反映元件（UAS）-靶基因的轉錄。GAL4UASUAS/Gal4系統(tǒng)FLP/FRT系統(tǒng)果蠅含有四對染色體，每對染色體中的一條被稱為同源染色體，分別來自于母本和父本

2、。在正常的細胞分裂中，一對同源染色體總是能忠誠地復制，然后分配到新分裂的細胞中FLP是一個來自酵母的染色體重組酶FRT則是FLP催化的一段DNA序列同源重組產生會兩個子細胞中，一個含有雙份正常染色體，令一個含有雙份突變染色體。如果我們在正常染色體上添加標示（GFP），那么，可以在果蠅組織中觀察突變細胞的表型變化如果兩條染色體中的一條是正常的，而另一條基因被突變掉，那么對于絕大部分沒有重組的細胞來說，它們是“雜合體”。FLP/FRT系統(tǒng)MARCM技術(mosaicanalysiswitharepressiblecellmarker)同源染色體重組非同源染色體組合GAL80UAS

3、/GFP/mutation突變細胞TUNEL法—DNA片段化與檢測細胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個漸進的過程，染色體DNA首先在核酸內切酶作用下，隨機切斷；在核小體單位之間被隨機切斷。形成180-200bp核小體式片段；DNA雙鏈斷裂出現缺口即可產生一系列DNA的3’-OH末端，被染色。增加細胞膜通透性TdT酶和熒光素標記的dUTP進入細胞在TdT酶的輔助下dUTP與凋亡細胞中斷裂DNA的3’-OH末端結合HRP標記的抗熒光素抗體特異結合HRP底物，H2O2發(fā)生氧化、環(huán)化反應，形成棕褐色顯微鏡下觀察TUNEL法—DNA片段化與檢測TUNEL法—DNA片段化與檢測