資源描述:
《《菌種保藏》PPT課件》由會員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、第三章發(fā)酵工業(yè)菌種的選育、保藏與復(fù)壯第一節(jié)菌種選育一、發(fā)酵工業(yè)常見微生物(一)細(xì)菌(bacteria)醋桿菌屬(Acetobacter)乳桿菌屬(Lactobacillus)芽孢桿菌屬(Bacillus)短桿菌屬(Brevibacterium)棒桿菌屬(Corynebacterium)(二)放線菌(actinomyces)最大的經(jīng)濟(jì)價值在于產(chǎn)生多種抗生素鏈霉菌(Streptomyces)小單孢菌屬(Micromonospora)蠟樣芽孢桿菌乳酸桿菌(三)霉菌(mould)1.曲霉屬(Aspergillus)黑
2、曲霉(A.niger)米曲霉(A.oryzae)黃曲霉(A.flavus)2.青霉屬(Penicillum)桔青霉(P.citrinum)青霉桔青霉3.根霉屬(Rhizopus)米根霉(R.oryzae)華根霉(R.chinensis)4.紅曲霉屬(Monascus)(四)酵母(yeast)酵母屬(Saccharomyces)啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae)2.假絲酵母屬(Candida)產(chǎn)朊假絲酵母(Candidautilis)3.畢赤酵母屬(Pichia)(五)其它微生物1.擔(dān)子
3、菌(basidiomycetes)即菇類(mushroom)2.藻類(alga)幾種菌落(六)噬菌體(phage)危害以細(xì)菌和放線菌為生產(chǎn)菌株的發(fā)酵工業(yè)。二、微生物發(fā)酵工業(yè)對菌種的要求1.生長迅速,目的產(chǎn)物產(chǎn)量高。2.易控制培養(yǎng)條件,發(fā)酵周期較短。3.抗雜菌和噬菌體的能力強(qiáng)。4.不易變異和退化,不產(chǎn)生任何有害物質(zhì)和毒素。三、工業(yè)微生物菌種的選育(一)自然選育1.自然選育的目的:(1)保持菌種優(yōu)良性狀的穩(wěn)定性(2)減少變異或降低變異退化的速度(3)獲得優(yōu)良菌種2.自然選育的方法采樣、增殖培養(yǎng)、分離培養(yǎng)和篩選。(
4、1)采樣①土樣(野生性菌株)②發(fā)酵液(生產(chǎn)性菌株)(2)增殖培養(yǎng)方法:①控制培養(yǎng)基成分②控制培養(yǎng)條件③抑制不需要的菌類一般情況下采來的樣品可以直接進(jìn)行分離培養(yǎng),但如果樣品種所含菌類的含量不多,而有大量的雜菌時,可以通過選擇性配制培養(yǎng)基(營養(yǎng)成分、添加抑制劑)、選擇一定的培養(yǎng)條件(如培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基的酸堿度)來控制。分離細(xì)菌時可加入制霉菌素或放線菌酮,抑制真菌生長。G-菌時可加入結(jié)晶紫、煌綠、膽汁。培養(yǎng)基呈微堿性。分離放線菌時加入植物、巖石、有機(jī)混合腐質(zhì)等的浸出液作為促生因子,也可用營養(yǎng)貧瘠或含幾丁質(zhì)的瓊脂培養(yǎng)
5、基。分離霉菌用低碳/氮比的培養(yǎng)基,再加入一定的抗生素;微酸性培養(yǎng)基。也可加入1:3000的玫瑰紅(3)純種分離①劃線法:簡單、快捷。②稀釋法:菌落單一均勻。接種針先以火焰滅菌法滅菌步驟一劃線分離法:輕觸營養(yǎng)平板上無菌的瓊脂處冷卻步驟二以接種針輕觸菌落,使接種針上沾有細(xì)菌。步驟三更換一個新的無菌營養(yǎng)平板步驟四將接種針上的細(xì)菌劃于一個新的營養(yǎng)平板上。此為第一菌區(qū)。步驟五重復(fù)第一步驟,將接種針以火焰滅菌法滅菌,然后輕觸瓊脂無菌處冷卻。步驟六由第五步驟的第一區(qū)中劃出第二區(qū),如右上圖。步驟七重復(fù)第六以及第七步驟,由第七
6、步驟的第二區(qū)中劃出第三區(qū),如右上圖。步驟八重復(fù)第六以及第七步驟,由第八步驟的第三區(qū)中劃出第四區(qū),劃滿剩下的空間。完成后的營養(yǎng)平板,如右上圖。步驟九在營養(yǎng)平板上貼好標(biāo)簽,標(biāo)示好接種日期、操作者姓名、菌種學(xué)名以及培養(yǎng)基名稱。步驟十固體培養(yǎng)基的稀釋涂抹接種法需要使用的儀器——震蕩機(jī)吸取準(zhǔn)備好欲稀釋的菌液吸取充分均勻后的菌液取含有9mL無菌水之試管,將試管口過火滅菌。將菌液置入,此時試管須做記號為第一次稀釋。將試管于震蕩機(jī)上,使菌液混合均勻取出試管中的第一次十倍稀釋菌液1mL,加入另一個新的含9mL無菌水的試管中。重
7、復(fù)此步驟直至所需要的稀釋濃度。從最后稀釋菌液中吸取0.1mL菌液,置入準(zhǔn)備好的無菌瓊脂內(nèi)。將三角玻璃棒浸于酒精中將三角玻璃棒在火焰上燃燒(須注意勿使燃燒中的酒精滴入酒精瓶中,引起燃燒)使用玻璃棒將菌液均勻涂布開來,將培養(yǎng)皿置于恒溫培養(yǎng)箱中隔天觀察菌落數(shù)目,再依照稀釋倍數(shù)推算出菌液濃度。(4)生產(chǎn)性能的測定一般采用兩步法:初篩:以量為主復(fù)篩:以質(zhì)為主①初篩:通過表現(xiàn)形態(tài)來淘汰不良菌株從菌落的大小、生長速度、顏色、孢子形成等形態(tài)特征分析判斷,去除可能低產(chǎn)的菌落,而將高產(chǎn)性菌落分離、篩選出來。使瓊脂平板培養(yǎng)基上的主
8、要菌落占90%以上。②復(fù)篩經(jīng)過分離培養(yǎng),在平板上出現(xiàn)很多單個菌落,通過菌落形態(tài)觀察,選出所需菌落,然后取菌落的一半進(jìn)行菌種鑒定,對于符合目的菌特性的菌落,可將之轉(zhuǎn)移到試管斜面純培養(yǎng)。復(fù)篩的菌種應(yīng)及時保存,避免過多傳代而造成新的退化。a.通過目的代謝產(chǎn)物的考察通過搖瓶培養(yǎng)進(jìn)行復(fù)篩,以進(jìn)一步考察菌種的生產(chǎn)能力的穩(wěn)定性。b.傳代的穩(wěn)定性試驗隨著菌種的逐級擴(kuò)大,經(jīng)過多次傳代產(chǎn)量仍保持穩(wěn)定的菌種才能用于生產(chǎn)。