基因克隆與表達finalZJJ

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1、基因的克隆與表達張靜靜2011-09-24業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-58717636基因克隆(genecloning)RACE技術(shù)服務(wù)基因表達(geneexpression)-原核基因表達-真核基因表達業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-58717636基因克隆GeneCloning業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-58717636概述克隆載體受體細(xì)胞體外重組的策略基因克隆工作流程業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biok

2、it.cn客服電話010-58717636一、概述確定了遺傳信息的攜帶者揭示了DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復(fù)制機理提出了中心法則和操縱子學(xué)說，破譯了遺傳密碼概述業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-587176361973年Cohen完成第一個基因工程實驗經(jīng)體外重組獲得雜合DNA雜合子轉(zhuǎn)化入大腸桿菌所需元件：限制性內(nèi)切酶連接酶載體受體細(xì)胞業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-58717636----通過體外重組技術(shù),將一段目的DNA經(jīng)切割、連接插入適當(dāng)載體，并導(dǎo)入受體細(xì)胞，擴增形成大量子

3、代分子的過程?；蚩寺。ǚ肿涌寺olecularcloning）業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-58717636基因克隆的核心-----體外重組(Recombination):人工將一段目的DNA插入一個載體的過程。業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-58717636基因克隆的技術(shù)路線目的基因載體體外重組重組子（雜合DNA）轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞篩選陽性克隆大量擴增，獲得子代DNA業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-58717636業(yè)務(wù)員QQ8074

4、75538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-58717636二、克隆載體復(fù)制基因(replicator)選擇性記號克隆位點業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-58717636三、受體細(xì)胞1、定義：外源DNA導(dǎo)入的細(xì)胞，是重組體擴增的場所。2、要求：易于接納外源DNA無特異的內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶載體復(fù)制、擴增不受阻與載體有互補性業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-58717636四、體外重組的策略粘-粘連接：最有效、最快捷業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.bioki

5、t.cn客服電話010-587176364、T-A克隆T-vector兩條鏈的5’端含有一個游離的TPCR過程中，普通的Taq酶可在產(chǎn)物的3’端多加一個A業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-58717636五、基因克隆的工作流程（一）目的基因的獲得（二）體外重組（三）轉(zhuǎn)化—Cacl2法、電擊法（四）重組子的篩選及鑒定1、篩選：平板法（抗生素、藍(lán)白斑）2、鑒定：長度鑒定：酶切、PCR（五）測序業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-58717636樣品的要求目標(biāo)基因序列（最好附原始測序報告）；克

6、隆模板（包括：菌液、質(zhì)粒、PCR擴增產(chǎn)物、RT-PCR擴增產(chǎn)物、從其他質(zhì)粒上酶切得到的DNA片段等）及檢測結(jié)果和背景資料；載體及其圖譜（常用載體可由我方免費提供）；注明克隆要求，克隆使用的酶切位點。業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-58717636服務(wù)流程載體構(gòu)建流程為：酶切、凝膠回收、連接、轉(zhuǎn)化、鑒定、測序。業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-58717636完成時間2周內(nèi)完成。業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-58717636最終產(chǎn)品構(gòu)建

7、好的重組質(zhì)粒，不少于1μg；含有重組質(zhì)粒的菌株；電泳圖譜，測序圖譜，酶切圖。業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-58717636快速擴增cDNA末端—RACE技術(shù)背景RACE的基本概念不同廠家RACE試劑盒的介紹RACE技術(shù)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)存在的問題及解決辦法最終產(chǎn)品的要求業(yè)務(wù)員QQ807475538公司網(wǎng)址：www.biokit.cn客服電話010-58717636技術(shù)背景得到某基因的片段、全長或近全長cDNA的方法：建立和篩選cDNA和DNA文庫。利用GenBa