色譜峰拖尾的原因

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1、色譜峰拖尾的原因色譜峰拖尾的原因有很多，例如：1．色譜柱本身填裝問(wèn)題,篩板堵塞或填料塌陷；柱壞；2．柱頭有污染；3．樣品超載；4．樣品溶劑不合適；5．柱外效應(yīng)；6．化學(xué)或二次保留（硅羥基）效應(yīng)；7．緩沖容量不足或不合適；8．重金屬污染。解決方法如下：一、與化學(xué)有關(guān)的拖尾問(wèn)題1．流動(dòng)相中，加入30mM的三乙胺（用于堿性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物），未知化合物加醋酸三乙胺；2．如仍然拖尾，將三乙胺換為二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；3.降低進(jìn)樣量至<1μg。二、與色譜柱有關(guān)的拖尾問(wèn)題1.如柱頭處有強(qiáng)保留的樣品組分積聚，反相柱可用20倍柱體積的96%的二氯甲烷與4%甲醇，加1%氫

2、氧化銨混合液沖洗；正向柱可用甲醇沖洗；2.使用保護(hù)柱。三、與HPLC系統(tǒng)有關(guān)的峰拖尾和峰加寬1.進(jìn)樣體積過(guò)大，（通?！?5μL）；2.進(jìn)樣閥與色譜柱及檢測(cè)器之間的管路體積過(guò)大（最佳連接管應(yīng)<20cm，內(nèi)徑為0.007"）；3.檢測(cè)器流通池的體積過(guò)大。多數(shù)色譜分析工作者在日常工作中想必都遇到過(guò)這樣的問(wèn)題：當(dāng)用反相柱進(jìn)行酸性或堿性化合物分析時(shí)，常常出現(xiàn)峰形拖尾現(xiàn)象，嚴(yán)重降低分離質(zhì)量和精度，尤其是使用自動(dòng)數(shù)據(jù)系統(tǒng)時(shí)。在此，筆者就各種造成峰形拖尾的原因作一次簡(jiǎn)淺的分析：[柱物理?yè)p壞]???色譜柱有物理?yè)p壞是造成峰形拖尾的根源。唯一的解決方法就是更換新柱。[柱內(nèi)填料污染]???流動(dòng)相和樣品中

3、的雜質(zhì)是色譜柱主要污染源。???流動(dòng)相所用的各種溶劑至少是分析純，盡量使用色譜純?cè)噭?。流?dòng)相所用的水最好是超純水或全玻璃器皿雙蒸水。用前先用0.45um溶劑微孔過(guò)濾（器）過(guò)濾，除去可能存在的微粒。流動(dòng)相建議現(xiàn)用現(xiàn)配，對(duì)于含鹽的溶液尤其注意長(zhǎng)置會(huì)產(chǎn)生細(xì)菌或出現(xiàn)沉淀。此外還得保證儲(chǔ)存流動(dòng)相的容器清潔。???復(fù)雜樣品可選用0.45um溶劑微孔過(guò)濾（器）或樣品預(yù)處理柱對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理，確保樣品中不含微粒雜質(zhì)。若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱。????柱內(nèi)填料污染時(shí)，可將柱頭螺絲卸下，用專用工具挖出柱內(nèi)前段被污染填料，再以相同的填料重新填入，修復(fù)?；蛞阅苋芙馕廴疚锏牧鲃?dòng)相按色譜柱使用的相反方向，

4、沖洗色譜柱（約20至30倍柱體積，或視具體情況而定；另外，此時(shí)不能接檢測(cè)器），將污染物沖出色譜柱，再按色譜柱標(biāo)明的使用方向使用。[柱進(jìn)口處有異物]???當(dāng)斷定是柱進(jìn)口處有異物時(shí)，可將柱頭螺絲卸下，取出濾帽并將其置于20%硝酸溶液中，用超聲波清洗約20分鐘，再置于超純水中，并用超聲波清洗約10分鐘，重新裝入色譜柱內(nèi)即可。[樣品濃度過(guò)高致使柱超載]???樣品在柱上超載能引起峰展寬，拖尾（或伸舌）。適當(dāng)減小進(jìn)樣量或樣品濃度（需要時(shí)，可提高檢測(cè)器靈敏度）直至峰形和保留時(shí)間不再改變，便可消除這種不良影響。減小進(jìn)樣量還能改善其分離度。正常情況下，樣品中每種化合物在150×4.6mm柱中進(jìn)樣量保

5、持在3～50ug范圍內(nèi)，不會(huì)引起明顯超載。[樣品溶劑不對(duì)]???選擇合適的樣品溶劑，以排除不必要的干擾。最好選用流動(dòng)相溶解樣品。[柱外效應(yīng)]???柱外效應(yīng)（即進(jìn)樣閥、色譜柱及檢測(cè)器間的管路過(guò)長(zhǎng)、直徑過(guò)粗、管路接頭不匹配、有死體積）是影響色譜柱柱效的主要因素之一。所以在可能的條件下，色譜柱的兩端連接管路要盡可能短，連接管內(nèi)徑盡可能細(xì)小，切口務(wù)必平整光滑，盡可能的減小死體積，以防止因樣品擴(kuò)散造成不能反映色譜柱真實(shí)柱效等情況發(fā)生。[緩沖不足或不合適]???在緩沖不好或離子強(qiáng)度過(guò)低的分離中，也會(huì)出現(xiàn)保留時(shí)間重現(xiàn)性差和峰形拖尾。增加緩沖濃度（與樣品大小相匹配）能改善此情況。[硅醇基團(tuán)作用]?

6、??仔細(xì)分析色譜柱內(nèi)填料表面性質(zhì)可知：反相色譜柱填料的表面大約被鍵合相覆蓋了一半，其余的就是未被鍵合的硅醇基團(tuán)。所謂的保留是指樣品分子與鍵合相相互作用的結(jié)果。但是，酸性或堿性化合物與硅膠表面殘存的硅醇基團(tuán)或金屬雜質(zhì)之間相互作用而引起雙重保留機(jī)理，因此，發(fā)生了峰形拖尾。???為了減小峰形拖尾，通?？稍诹鲃?dòng)相加入25mM三乙胺（抑制劑）。三乙胺能與硅醇基團(tuán)發(fā)生強(qiáng)烈的相互作用，從而降低或阻斷樣品分子與硅醇基團(tuán)的作用，以保證保留機(jī)理正常進(jìn)行，并大大緩解了峰形拖尾。使用長(zhǎng)鏈的硅醇基抑制劑，雖起效較慢，但持續(xù)力較三乙胺長(zhǎng)。因?yàn)橐种苿┓肿又谐税坊c硅醇基團(tuán)發(fā)生極性作用外，大分子中非極性部分與固

7、定相也會(huì)發(fā)生反相作用而產(chǎn)生保留現(xiàn)象。如果將抑制劑加至樣品中，效果會(huì)顯著。[柱內(nèi)金屬污染]???柱內(nèi)金屬污染（Fe，Ni等）可引起某引些化合物峰形拖尾。金屬可由填料本身帶進(jìn)，也可由腐蝕性流動(dòng)相緩慢溶解柱進(jìn)口的金屬濾片，隨流動(dòng)相沉積到柱填料中。例如C18柱填料被金屬污染后，造成酸性/堿性樣品拖尾，可用堿洗/酸洗后再鍵合的填料，得到的峰是尖銳且對(duì)稱的。?總而言之，解決峰形拖尾難題涉及到大量化學(xué)知識(shí)和應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，讀者可以根據(jù)自己實(shí)際情況加以總結(jié)，不斷提高分析技術(shù)水平。