熒光免疫標(biāo)記65

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1、熒光免疫標(biāo)記技術(shù)免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescencetechnique）又稱熒光抗體技術(shù)。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技術(shù)。該技術(shù)的主要優(yōu)缺點(diǎn)主要優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、敏感性高、速度快。主要缺點(diǎn)：非特異性染色問題尚未完全解決，結(jié)果判定的客觀性不足，技術(shù)程序也還比較復(fù)雜。免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)是將抗原抗體反應(yīng)的特異性和敏感性與顯微示蹤的精確性相結(jié)合。以熒光素作為標(biāo)記物，與已知的抗體(或抗原)結(jié)合、但不影響其免疫學(xué)特性。然后將熒光素標(biāo)記的抗體作為標(biāo)準(zhǔn)試劑，用于檢測(cè)

2、和鑒定未知的抗原。在熒光顯微鏡下，可以直接觀察呈現(xiàn)特異熒光的抗原抗體復(fù)合物及其存在部位。免疫熒光技術(shù)-基本原理熒光是指一個(gè)分子或原子吸收了給予的能量后，即刻引起發(fā)光；停止能量供給，發(fā)光亦瞬即停止。熒光素是一種可吸收激發(fā)光的光便能產(chǎn)生熒光，并能作為染料使用的有機(jī)化合物，亦稱熒光色素。發(fā)生原理---基態(tài)?激發(fā)態(tài)產(chǎn)生特點(diǎn)：激發(fā)---即刻產(chǎn)生停止激發(fā)---瞬間消失種類---光致熒光，化學(xué)熒光，X線熒光，陰極射線熒光熒光熒光色素:能夠產(chǎn)生明顯熒光并能作為染料使用的有機(jī)化合物稱為熒光色素或熒光染料。用于標(biāo)記抗

3、體的熒光色素，必須具有化學(xué)上的活性基因，能與蛋白質(zhì)穩(wěn)定結(jié)合，且不影響標(biāo)記抗體的生物活性及抗原抗體的特異性結(jié)合。異硫氰酸熒光素(FITC)熒光FITC+RB200標(biāo)記光源：高壓汞燈、氙燈、鹵素?zé)魹V板：隔熱濾板、激光濾板（UG、BG）、吸收濾板（OG、GG）光路：透射光、落射光熒光顯微鏡討論分析熒光顯微鏡臺(tái)式機(jī)---FACSCalibur雙激光---488nm635nm四熒光參數(shù)分選、濃縮系統(tǒng)大型機(jī)---FACSVantageSE多激光多波長八熒光參數(shù)高速分選單細(xì)胞點(diǎn)對(duì)點(diǎn)分選基本原理---熒光顯微鏡；

4、熒光Ab；標(biāo)本（組織或細(xì)胞中Ag)技術(shù)類型：直接法---熒光素標(biāo)記Ab直接檢測(cè)間接法---熒光素標(biāo)記二抗補(bǔ)體結(jié)合法---熒光素標(biāo)記抗補(bǔ)體Ab雙結(jié)合法---兩種熒光素標(biāo)記Ab重點(diǎn)熒光免疫顯微技術(shù)間接免疫熒光檢測(cè)自身抗核抗體FALSSensorLaser前向角散射光（FSC）：反映細(xì)胞的大小熒光免疫顯微技術(shù)FALSSensor90LSSensorLaser側(cè)向角散射光（SSC）：反映細(xì)胞內(nèi)的顆粒多少熒光免疫顯微技術(shù)雙色直接染色細(xì)胞T細(xì)胞B細(xì)胞熒光免疫顯微技術(shù)直方圖分析：對(duì)細(xì)胞的某一個(gè)單參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析

5、橫坐標(biāo)為熒光或散射光強(qiáng)度縱坐標(biāo)為細(xì)胞數(shù)熒光免疫顯微技術(shù)間接免疫熒光法示意圖