細胞生物學的研究技術和方法線粒體活體染色與觀察

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1、請同學們按學號坐好,先不要開電腦顯微鏡醫(yī)學細胞生物學實驗李姣（吳明松）細胞生物學與遺傳學教研室2014.11～2014.12TEL：8609692E-mail:270378076@qq.aom1號綜合樓2-25室預習；穿白大衣并扣好；認真操作；愛護儀器；保持衛(wèi)生；保持安靜。實驗室規(guī)則1#############。2#########。3############。4###################。5#############。6#########7#########實驗課要求實驗室安全注意事項實驗完成后檢查水電；實驗動物回

2、收焚燒：填表責任制；了解化學試劑毒性和安全使用規(guī)則；突發(fā)情況處理及逃生，如各種原因起火分別用關電閘、蓋布、打開門窗、報警，及其他突發(fā)情況，依次離開實驗室及大樓等。本學期實驗教學進度安排第一次(驗證性)細胞生物學研究技術和方法線粒體的活體觀察第二次(驗證性)細胞內酸性蛋白和堿性蛋白的原位顯示細胞內DNA和RNA的原位顯示第三次(驗證性)細胞膜的通透性觀察小白鼠腹腔巨噬細胞吞噬活動的觀察第四次(驗證性)細胞內過氧化物酶的原位顯示細胞有絲分裂的觀察第五次(設計性)設計性實驗報告匯報及指導第六次(設計性)動物細胞融合細胞核的分離與鑒定評

3、分標準第一次實驗Ⅰ細胞生物學的研究技術和方法Ⅱ線粒體活體染色與觀察I細胞生物學的研究技術和方法細胞形態(tài)結構研究技術顯微觀察亞顯微觀察細胞的培養(yǎng)技術細胞組分的分離純化技術細胞和亞細胞組分的測定分級分離技術層析法電泳法細胞化學法熒光細胞化學法放射自顯影技術顯微結構microscopicstructure在光學顯微鏡下所觀察到的細胞結構亞微結構submicroscopicstructure細胞內小于0.2μm的細微構造，通常使用各種電子顯微鏡進行觀察細胞形態(tài)結構研究技術分辨力（率）resolution顯微鏡或人眼在25cm的明視距離處

4、能夠區(qū)分相近兩點最小距離的能力。普通光學顯微鏡lightmicroscope，LM染色后可觀察線粒體、中心體、細胞核等結構最大分辨力一般為0.2μm相差顯微鏡phasecontrastmicroscope觀察活細胞的微細結構和變化暗視野顯微鏡darkfieldmicroscope反差大、分辨力高（0.04μm)觀察活細胞內細胞器以及液體介質中的細菌和真菌等的存在和運動熒光顯微鏡fluorescencemicroscope光源——紫外線細胞熒光化學，特別是免疫熒光技術中的重要工具，可觀察細胞或標本中的熒光現(xiàn)象分辨力達0.08nm觀

5、察細胞內部結構二維平面圖像透射電子顯微鏡TEM掃描電子顯微鏡SEM分辨力一般在3nm觀察細胞（樣本）表面形貌三維立體圖像細胞的培養(yǎng)技術細胞培養(yǎng)cellculture細胞在體外的培養(yǎng)技術，即在無菌條件下，從機體中取出組織或細胞，模擬機體內正常生理狀態(tài)下生存的基本條件，讓它在培養(yǎng)器皿中繼續(xù)生存、生長和繁殖的方法。原代培養(yǎng)primaryculture直接從機體獲取的組織或細胞進行的首次培養(yǎng)。原代細胞以一定比例轉移到另一個或幾個容器中的擴大培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)secondaryculture一般傳一次稱為一代細胞融合cellfusion又稱為

6、細胞雜交，指細胞彼此接觸時，兩個或兩個以上的細胞合并形成一個細胞的現(xiàn)象。含有同一親本細胞核的融合細胞含有不同親本細胞核的融合細胞同核體homokaryon異核體heterokaryon細胞融合技術自然融合人工誘導融合細胞融合技術是研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤等的重要手段，尤其對單克隆抗體及細胞去分化的研究開拓了一條新的途徑物理化學生物細胞組分的分離純化技術細胞組分的分級分離cellfractionation根據(jù)細胞內各種結構的比重和大小等不同，在同一離心場內的沉降速度也不同的原理，用不同介質或不同轉速的離心，將細胞內各組分分級分

7、離出來，并進行分析的方法?；静襟E組織勻漿分級分離分析密度梯度離心差速離心用細胞化學法或生物化學的方法分析、鑒定得到的細胞組分差速離心密度梯度離心細胞和亞細胞組分的測定細胞化學法cytochemicalmethod在保持細胞結構的基礎上，利用某些化學物質可與細胞內某種成分發(fā)生化學反應，在局部范圍形成有色沉淀物（或電子密度高的物質）的原理，對細胞的化學成分進行定性、定位和定量的研究。堿性蛋白顯示酸性蛋白顯示I細胞生物學的研究技術和方法細胞形態(tài)結構研究技術顯微觀察亞顯微觀察細胞的培養(yǎng)技術細胞組分的分離純化技術細胞和亞細胞組分的測定分

8、級分離技術層析法電泳法細胞化學法熒光細胞化學法放射自顯影技術II線粒體活體染色與觀察了解線粒體的原位分布；了解活體染色的原理和方法。一、實驗目的二、實驗原理線粒體上的細胞色素氧化酶系可保持詹納斯綠B染料始終處于氧化狀態(tài)而呈綠色。活體染色：應用無毒或毒性較小的染色