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1、液相色譜柱的選擇楊定忠博納艾杰爾科技156119833289；dz_yang@agela.com.cn客服：400-606-80992010年11月12月廣東影響C18色譜柱性能的主要因素色譜柱與色譜填料的特性1、柱填料硅膠純度粒徑比表面積孔徑2、色譜柱的構(gòu)型色譜柱直徑色譜柱長(zhǎng)度3、固定相鍵合類型殘余硅羥基的影響反相鍵合相的保留行為鍵合硅膠的穩(wěn)定性物理因素化學(xué)因素柱填料對(duì)色譜柱性能的影響柱填料對(duì)C18色譜柱性能的影響：硅膠純度I2.3-二羥基萘2.7-二羥基萘TF=1.31BrandW,AQColumn5μm,4.6mm×150mmBrandZ,C18Column5μ
2、m,4.6mm×150mmVenusilMPC185μm,4.6mm×150mmBrandH,C18Column5μm,4.6mm×150mmBrandU,C18Column5μm,4.6mm×150mm！TF=1.42TF=1.39TF=1.69TF=？流動(dòng)相：甲醇：水=65：35流速：1mL/min溫度：35℃檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm進(jìn)樣量：20μL硅膠純度－金屬含量柱填料對(duì)C18色譜柱性能的影響：硅膠純度II硅膠純度－金屬含量d柱填料對(duì)C18色譜柱性能的影響：粒徑硅膠粒徑和類型對(duì)柱效的影響d硅膠粒徑和類型對(duì)壓力的影響柱填料對(duì)C18色譜柱性能的影響：粒徑II目前市場(chǎng)主
3、要可供選擇的填料粒徑1.7μm，1.8μm，2.2μm－快速液相色譜柱：匹配快速色譜儀2.7μm－多孔殼層：在常規(guī)液相色譜儀上實(shí)現(xiàn)快速分離(Halo)3.0μm，3.5μm－普通快速分析5.0μm－常規(guī)分析顆粒越小，柱效越高,但是耐污染性能下降，柱壓升高.柱填料對(duì)C18色譜柱性能的影響：比表面積每克填料的表面積，與粒度，孔徑有關(guān)比表面積大，保留增加，載樣量增加，平衡時(shí)間增加(梯度洗脫尤為注意)根據(jù)需要選擇合適的比表面積柱填料對(duì)C18色譜柱性能的影響：孔徑I多孔材料的95%以上表面在孔內(nèi)部樣品分子直徑小于平均孔徑，才能進(jìn)入微粒內(nèi)部孔徑至少是樣品流體學(xué)直徑的4倍300?孔
4、徑用于：超過50個(gè)氨基酸的肽或25個(gè)殘基的低聚寡核苷酸樣品分子直徑小于平均孔徑，才能進(jìn)入微粒內(nèi)部柱填料對(duì)C18色譜柱性能的影響：孔徑II小生物分子的保留值在小孔徑填料通常更大條件：C8色譜柱，4.6×150mm，3.5um，A溶劑，0.1%TFA水溶液；B溶劑，0.1%TFA于80%乙腈－水中；20min梯度，1030%B；60°C，1.5ml/min色譜柱的構(gòu)型對(duì)色譜柱性能的影響色譜柱的構(gòu)型對(duì)色譜柱性能的影響：長(zhǎng)度和直徑色譜柱尺寸對(duì)色譜分離的影響：?短柱(15-100mm)-運(yùn)行時(shí)間短,柱壓低?長(zhǎng)柱(150-250mm)-分辨率高,運(yùn)行時(shí)間長(zhǎng)?窄徑柱(?2.1mm)
5、-檢測(cè)器靈敏度高?寬徑柱(3-21.2mm)-載樣量高固定相對(duì)色譜柱性能的影響固定相對(duì)色譜柱性能的影響：鍵合類型A縱向交聯(lián)：保留和選擇不穩(wěn)定B橫向交聯(lián)：寬pH適用，Durashell，C單體鍵合：重現(xiàn)性好，柱效高D單體（空間保護(hù)）：低pH穩(wěn)定（VenusilASB）固定相對(duì)色譜柱性能的影響：殘余硅羥基的影響殘余硅羥基的影響普通硅膠當(dāng)流動(dòng)相的pH值大于4.5-5.0時(shí)，表面的硅羥基會(huì)帶負(fù)電荷，堿性化合物拖尾。解決方法封尾雙層表面修飾固定相對(duì)色譜柱性能的影響：殘余硅羥基的影響封尾鍵合填料與小硅烷進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)，如三甲基氯硅烷，反應(yīng)掉部分殘余硅羥基，以增加表面覆蓋率。缺點(diǎn)：不
6、能完全反應(yīng)（仍有50%的硅羥基未被反應(yīng)）在pH<3時(shí)，TMS易流失，耐用性，穩(wěn)定性不好TMS固定相對(duì)色譜柱性能的影響：殘余硅羥基的影響不同長(zhǎng)度和體積的鍵合相對(duì)表面覆蓋率的影響固定相對(duì)色譜柱性能的影響：殘余硅羥基的影響雙層表面修飾降低表面硅羥基活性，硅膠表面更加均勻固定相對(duì)色譜柱性能的影響：殘余硅羥基的影響硅膠雙層表面修飾后新增加表面層硅羥基活性更低－新硅羥基pH=5.2，普通硅羥基pH約為3.5更對(duì)稱的峰型硅膠表面更均勻－硅膠微晶形成過程中的不光滑表面被覆蓋重現(xiàn)性更好表面純度更高－硅膠金屬雜質(zhì)被覆蓋極性化合物保留和分離更好固定相對(duì)色譜柱性能的影響：殘余硅羥基的影響雙層
7、表面修飾代表產(chǎn)品：VenusilMPC18，VenusilASBC18，VenusilHILIC0.01ng/mLPseudoephedrineAgelaVenusilASBC18,2.1×50mm,5μmBrandAC182.1×50mm,5μmPhenomenexLunaC18,2.0×50mm,5μm固定相對(duì)色譜柱性能的影響：反相鍵合相的保留行為同一廠家相同硅膠基質(zhì)的反相柱：保留值隨含碳量的增加而增加比表面積越大，保留值越大鍵合碳鏈越長(zhǎng)，保留越大C18C8>C3>C1，長(zhǎng)鏈之間差別不大≈固定相對(duì)色譜柱性能的影響：反相鍵合相的保留行為不同廠家色譜
