微生物的分離培養(yǎng)和菌種保藏

《微生物的分離培養(yǎng)和菌種保藏》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。

1、實(shí)驗(yàn)七微生物的分離、培養(yǎng)和菌種保藏微生物的分離、培養(yǎng)和菌種保藏目的要求實(shí)驗(yàn)材料試驗(yàn)程序思考題目的要求初步掌握微生物的分離、培養(yǎng)和菌種保藏的基本方法。練習(xí)微生物接種、移植和培養(yǎng)的基本技術(shù)，掌握無(wú)菌操作技術(shù)。實(shí)驗(yàn)材料樣品：新鮮土壤。培養(yǎng)基：滅菌的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、淀粉瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基（10mL裝）。無(wú)菌水：帶有玻璃珠裝有45mL無(wú)菌水三角瓶、裝有9mL無(wú)菌水的試管。其它：無(wú)菌培養(yǎng)皿、無(wú)菌吸管、無(wú)菌三角玻棒、臺(tái)天平、記號(hào)筆、接種環(huán)、酒精燈、火柴、標(biāo)簽紙、膠水、水浴鍋。試劑：5000U/mL鏈霉素液0.5％重鉻酸鉀液實(shí)驗(yàn)程序微生物的分離微生物的接種方法（示

2、范）微生物培養(yǎng)中的氧氣條件微生物的菌種保藏方法四大類(lèi)微生物菌落形態(tài)的比較和識(shí)別實(shí)驗(yàn)程序1（微生物的分離）用稀釋平板法（又名混菌法）從土壤中分離真菌。用平板涂抹法分離土壤中的放線(xiàn)菌（土壤稀釋液制備同上）。用平板劃線(xiàn)法分離土壤中的細(xì)菌（土壤稀釋液的制備同上）。實(shí)驗(yàn)程序2（微生物的分離—稀釋平板法）制備土壤稀釋液：(無(wú)菌操作過(guò)程見(jiàn)教師示范）1.稱(chēng)取土壤5g，放入45mL無(wú)菌水的三角瓶中，振蕩10min，即為稀釋10－1的土壤懸液。2.另取裝有9mL無(wú)菌水試管5支，用記號(hào)筆編上10－2、10－3、10－4、10－5、10－6。取已稀釋成10－1的土壤液，振蕩后靜止0.5mi

3、n，用無(wú)菌吸管吸取1mL土壤懸液加入10－2的無(wú)菌水的試管中，并在試管內(nèi)輕輕吹吸數(shù)次，使之充分混勻，即成10－2土壤稀釋液。同法依次連續(xù)稀釋至10－410－510－6土壤稀釋液。在土壤稀釋過(guò)程中，應(yīng)用一支吸管由濃到稀，稀釋到底，稀釋方法見(jiàn)圖-1。實(shí)驗(yàn)程序3（微生物的分離—稀釋平板法）圖－1土壤稀釋液的制備和稀釋液的取樣實(shí)驗(yàn)程序4（微生物的分離—稀釋平板法）涂平板：每組取培養(yǎng)皿2付，即每個(gè)同學(xué)做一只。1.先在無(wú)菌培養(yǎng)皿底部貼上標(biāo)簽，注明分離菌名、稀釋度、組別、班級(jí)。2.另取一吸管，以無(wú)菌操作法吸取10－4或10－5土壤稀釋液1mL，加在無(wú)菌培養(yǎng)皿的一邊，在皿的另一邊加

4、入2滴5000U/mL的鏈霉素液。此時(shí)兩液嚴(yán)防相混。3.取已熔化的在水浴鍋中保溫500C左右的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基2管，分別倒入上述培養(yǎng)皿中（見(jiàn)圖－2），輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使菌液、鏈霉素液、培養(yǎng)基充分混勻鋪平，放在平坦的桌面上，凝固后，倒置于28～300C恒溫培養(yǎng)5～6d。觀察真菌菌落形態(tài)以及計(jì)數(shù)菌落。并計(jì)算出每g土壤中真菌的數(shù)量。即用某一培養(yǎng)皿內(nèi)真菌的菌落數(shù)乘以該培養(yǎng)皿接種液的稀釋倍數(shù)即得。挑取單個(gè)菌落，接種到斜面培養(yǎng)基上作純化和性能測(cè)定，若不純，需要繼續(xù)分離。實(shí)驗(yàn)程序5（微生物的分離—稀釋平板法）實(shí)驗(yàn)程序6（微生物的分離—平板涂抹法）每組取無(wú)菌培養(yǎng)皿2付（每個(gè)同學(xué)做一

5、只）。在皿底貼上標(biāo)簽，注明分離菌名、稀釋度、組別、班級(jí)。以無(wú)菌操作法先在培養(yǎng)皿中加入0.5％重鉻酸鉀溶液2滴，取已熔化的淀粉瓊脂培養(yǎng)基2管，分別倒入培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基與重鉻酸鉀充分混勻，鋪平，制成平板。凝固后，另取一支吸管吸取10－3或10－4的土壤稀釋液0.2mL放在平板上。用無(wú)菌三角玻棒將稀釋液在平板表面涂抹均勻。倒置于28～300C條件下培養(yǎng)6～7d，觀察放線(xiàn)菌菌落形態(tài)及計(jì)數(shù)菌落，并計(jì)算出每g土壤中放線(xiàn)菌的數(shù)量（方法同上）。挑取單個(gè)菌落，接種于相應(yīng)的斜面培養(yǎng)基上，如果不純，再移植純化，至最后得到純培養(yǎng)為止。實(shí)驗(yàn)程序7（微生物的分離—平板涂抹法）實(shí)驗(yàn)程序8（微生物

6、的分離—平板劃線(xiàn)法）每組取無(wú)菌培養(yǎng)皿2付，在皿底貼上標(biāo)簽，注明事項(xiàng)。取已熔化的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，倒入平皿，制成平板。凝固后，用接種環(huán)取相應(yīng)的菌液一環(huán)（10－5或10－6）在平板上劃線(xiàn)（教師作示范）。1.連續(xù)劃線(xiàn)法：將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面作連續(xù)劃線(xiàn)（圖－5）。完畢后，倒置于28～300C溫室培養(yǎng)。2.分區(qū)劃線(xiàn)法：用接種環(huán)以無(wú)菌操作挑取土壤稀釋液1環(huán)，先在培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線(xiàn)3—4條，再轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約600C角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過(guò)第一次劃線(xiàn)部分作第二次劃線(xiàn)會(huì)，同法依次作第三次和第四次劃線(xiàn)（見(jiàn)圖－5）。劃線(xiàn)完畢，蓋上皿蓋，倒置于28

7、～300C溫室培養(yǎng)。挑取單個(gè)菌落接種于斜面培養(yǎng)基上，如果不純，再移植純化，最后得到純培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)程序9（微生物的分離—平板劃線(xiàn)法）實(shí)驗(yàn)程序10（微生物的接種方法）接種方法：常用的有斜面接種法、平板接種法、液體接種法、試管深層固體培養(yǎng)基的穿刺接種法。接種工具：常用的有接種針、接種環(huán)、接種鉤、接種圈、接種鏟或接種鋤、玻璃涂棒等（見(jiàn)圖－6）。圖－6試驗(yàn)程序11（微生物的接種方法—斜面接種法）實(shí)驗(yàn)程序12（微生物的接種方法—斜面接種法）左手平托兩支試管，拇指按住試管底部。外側(cè)使是菌種試管，內(nèi)側(cè)是待接的空白斜面。（兩支試管的斜面同時(shí)向上），右手將棉塞旋松，以便在接種時(shí)容易拔