血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)活力測(cè)定

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1、2014級(jí)12班1組201450557陸麗霞血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）活力測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理：以丙氨酸和ɑ-酮戊二酸為底物，在血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的作用下，生成丙酮酸和谷氨酸；丙酮酸產(chǎn)量的多少，即反應(yīng)酶活性的大小,丙氨酸能與2，4-二硝基苯肼結(jié)合，生成丙酮酸二硝基苯腙。丙酮酸二硝基苯腙在堿性溶液中呈現(xiàn)棕色，可用比色測(cè)定。實(shí)驗(yàn)步驟：1.標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：⑴取6支試管并編號(hào)，按表4-16操作；表4-16標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制試劑對(duì)照123452mmol/L丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液00.050.100.150.200.25底物溶液0.500.450.400.350.300.25PB

2、S緩沖液0.10.10.10.10.10.1混勻，37攝氏度水浴5分鐘，然后各管加入2,4—二硝基苯肼2,4——二硝基苯肼0.50.50.50.50.50.5混勻，37攝氏度水浴20分鐘，然后各管加入0.4mol/LNaOH0.4mol/LNaOH5.05.05.05.05.05.0相當(dāng)于ALT活力單位0285797150200A52000.0590.1070.1670.2080.249⑵將所得6支試管混勻，10min后以對(duì)照組調(diào)零，用520nm波長(zhǎng)比色并讀取吸光度；⑶以吸光度為縱坐標(biāo)，各管相應(yīng)的轉(zhuǎn)氨酶單位為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線1．酶活性測(cè)定：⑴取2

3、支試管，編號(hào)，按表4-17操作：表2ALT活力測(cè)定試劑對(duì)照測(cè)定血清——0.1PBS緩沖液0.1——底物溶液0.50.5混勻，37攝氏度水浴30分鐘，然后各管加入2,4——二硝基苯肼2,4—二硝基苯肼0.50.5混勻，37攝氏度水浴20分鐘，然后各管加入0.4mol/LNaOH0.4mol/LNaOH5.05.0A52000.122⑵用520nm波長(zhǎng)比色，以對(duì)照管調(diào)零，讀取測(cè)定管吸光度；實(shí)驗(yàn)結(jié)果:由標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y=0.0014x，當(dāng)A520=0.122，即y=0.122，故x=87那么測(cè)得ALT酶活力單位為87討論：1．查資料得參考正常值為40單位以下

4、，實(shí)驗(yàn)測(cè)得ALT酶活力單位為87，機(jī)體可能發(fā)生了肝病變。2．查資料得，急性肝炎和中毒性肝細(xì)胞壞死時(shí)血清ALT顯著增高；慢性肝炎、肝癌、肝硬化及心肌梗死時(shí)血清ALT中度增高；阻塞性黃疸和膽道炎癥時(shí)血清ALT中度增高。血清總膽固醇測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理：血清中的膽固醇酯在酶的作用下水解為膽固醇，膽固醇在其氧化酶的作用下產(chǎn)生過(guò)氧化氫，它可以在過(guò)氧化氫酶作用下與苯酚及4-氨基安替比林作用下生成紅色化合物醌亞胺。在500nm波長(zhǎng)處的吸光度即可計(jì)算出血清總膽固醇含量。實(shí)驗(yàn)步驟：1.取3支試管，編號(hào)，按表4-10操作：表4-10膽固醇溶液的配置試劑標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管空管血清——0

5、.02——膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液0.02————酶工作液1.51.51.5A5000.2020.1890.0002.混勻后，置于37攝氏度水浴15min3.在500nm波長(zhǎng)下比色，以空白管調(diào)零，測(cè)定各管吸光度實(shí)驗(yàn)計(jì)算：總膽固醇（mmol/L）=A測(cè)定/A標(biāo)準(zhǔn)×5.18故總膽固醇（mmol/L）=0.202/0.189×5.18=5.536（mmol/L）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：所測(cè)得的血清總膽固醇的含量為5.536mmol/L討論：1．血清總膽固醇的參考正常值為：2.59～6.47mmol／L，實(shí)驗(yàn)所測(cè)值在正常范圍2．高膽固醇血癥常見(jiàn)于動(dòng)脈粥樣硬化癥，、家族性高膽固醇血癥、

6、糖尿病腎病綜合征、甲狀腺功能減退、阻塞性黃疸、肥胖病等3．低膽固醇常見(jiàn)于嚴(yán)重貧血、甲狀腺功能亢進(jìn)、營(yíng)養(yǎng)不良等尿酮體的定性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)原理：酮體中的乙酰乙酸及丙酮在堿性條件下與亞硝基鐵氰化鈉作用產(chǎn)生紫紅色化合物實(shí)驗(yàn)步驟：1.取“酮體測(cè)試粉末”少許置于濾紙上2.滴加一滴尿液于測(cè)試粉末上3.稍待一到兩分鐘，觀察結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果：未出現(xiàn)紫紅色（—）討論：1．正常人每天排出酮體少于100mg，且主要是丙酮，故應(yīng)為（—）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果未出現(xiàn)紫紅色，說(shuō)明該機(jī)體尿酮體處于正常值，相關(guān)器官未發(fā)生病變2．尿酮體陽(yáng)性主要見(jiàn)于糖尿病酮癥酸中毒、急性風(fēng)濕熱、結(jié)核病、敗血癥、急性胃腸炎伴嚴(yán)

7、重脫水、麻醉后、中毒性休克等