HCG檢測溯源問題

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1、人絨毛膜促性腺激素檢測溯源問題劉奉亭青島蘭信醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所，青島266100摘要　目的：探討HCG檢測的溯源性及實(shí)驗(yàn)間檢驗(yàn)結(jié)果互相認(rèn)可中存在的問題。方法：結(jié)合國際國內(nèi)HCG檢測現(xiàn)狀，對有關(guān)HCG檢測的影響因素及國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)方面的問題進(jìn)行綜述。結(jié)果：HCG分子及其裂解產(chǎn)物種類繁多，抗原性相似又不完全相同，不同廠家試劑使用的抗體組合不同，對HCG類分子的識別不同。一些試劑的標(biāo)簽不正確或不清楚，一些實(shí)驗(yàn)人員對HCG檢驗(yàn)的分子種類不清楚，國內(nèi)HCG收費(fèi)項(xiàng)目不全，是導(dǎo)致有意無意錯報(bào)檢驗(yàn)項(xiàng)目的原因。目前發(fā)布的HCG國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)含有雜質(zhì)，并且對于無活性的α亞

2、基和β亞基賦值錯誤。這些都給HCG檢測結(jié)果的實(shí)驗(yàn)室間互相認(rèn)可帶來困難。結(jié)論：HCG檢測的溯源及檢驗(yàn)結(jié)果的實(shí)驗(yàn)室間互相認(rèn)可尚存在許多問題。要解決這些問題，需要新的、以摩爾濃度賦值的HCG國際標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)布，各試劑廠商以新的國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為抗原來制備抗體，并用新的抗體制備的HCG檢測試劑溯源到新的國際標(biāo)準(zhǔn)。另外，還要進(jìn)一步普及有關(guān)HCG類分子及其裂解產(chǎn)物的知識宣傳。血清人絨毛膜促性腺激素（HCG）的測定對于妊娠的確認(rèn)和監(jiān)測，異位妊娠及其治療的監(jiān)測，產(chǎn)前篩查，先兆流產(chǎn)、滋養(yǎng)層疾病、非滋養(yǎng)層腫瘤、生殖細(xì)胞瘤、膀胱癌、睪丸癌、肺癌等的診斷和治療效果的監(jiān)測

3、具有十分重要的意義[1-7]。人絨毛膜促性腺激素（HCG）與促黃體生成激素（LH）、促卵泡激素（FSH）及促甲狀腺激素（TSH）都是由一個(gè)α亞基和一個(gè)β亞基所組成[8,9]。這些激素都擁有共同的α亞基，它們的區(qū)別在β亞基[10]。HCG的β亞基與FSH、TSH不同，但與LH的β亞基類似，LH的β亞基含有121個(gè)氨基酸，而HCG的β亞基含有145個(gè)氨基酸，在LH的β亞基的C末端延伸了24個(gè)氨基酸[11]。早期，人們采用生物學(xué)方法進(jìn)行妊娠實(shí)驗(yàn)，將尿液注入幼鼠等動物，通過觀察動物的反應(yīng)而判斷是否懷孕。1960年Wide和Gemzell建立了首個(gè)妊

4、娠實(shí)驗(yàn)的免疫學(xué)方法――紅細(xì)胞凝集法[12]。由于當(dāng)時(shí)使用的是抗HCG血清，測定HCG時(shí)會受到LH、FSH和TSH等激素的干擾。1972年Vaitukaitis等使用抗HCGβ亞基血清，建立了β-HCG的放射免疫測定法[13]。由于HCGβ亞基與其它激素β亞基的區(qū)別，該測定方法與生理濃度的LH、FSH和TSH沒有顯著的交叉反應(yīng)，可更為準(zhǔn)確地反映標(biāo)本中的HCG含量。隨著免疫檢測方法學(xué)的不斷改進(jìn)，目前大多數(shù)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)基本都使用（電）化學(xué)發(fā)光法對HCG進(jìn)行全自動的檢測。HCG及其衍生物有很多種，來源與生理學(xué)功能各不相同。有常規(guī)HCG[14-16]

5、、高度糖基化的HCG[15-16]、硫酸化的HCG[17,18]、游離α亞基[19,20]、高度糖基化的游離α亞基[19,20]、游離β亞基[21]、高度糖基化的游離β亞基[22-26]。在激素的產(chǎn)生、分泌、代謝等過程中，HCG分子會發(fā)生斷裂、解離等多種變化，從而在血、尿中以多種分子形式存在。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有15種形式的HCG[27]（圖1）。所有的HCG類檢測試劑的定標(biāo)品都使用可溯源至WHO的HCG標(biāo)準(zhǔn)。最早的WHO國際標(biāo)準(zhǔn)品（1938年和1964年）是HCG的粗制品。1978年這些國際標(biāo)準(zhǔn)品被高度純化的HCG制品--第一批國際參考制品所取

6、代。這一標(biāo)準(zhǔn)品于1986作為第三批國際標(biāo)準(zhǔn)品、1999年作為第四批國際標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)布。當(dāng)今，所有的HCG類檢測試劑的定標(biāo)品都可溯源至第三批或第四批國際標(biāo)準(zhǔn)品。由于這些標(biāo)準(zhǔn)品是從商品的孕婦尿液的粗提取物純化而來[28,29]。而這些尿液都是在沒有溫度控制的條件下收集和儲存的，存在著HCG分子的解離和斷裂,純度也存在一定的問題。HCG測試方法使用的抗體也是針對這些尿液粗提取物純化的HCG及其亞基的[30]抗體。為解決HCG國際標(biāo)準(zhǔn)品不純等問題，2003-2005年WHO的IFCC工作組從人尿中純化了完整HCG、缺刻HCG、HCGβ亞基、缺刻HCGβ

7、亞基、HCGα亞基、HCGβ核心部分等6種形式的HCG，制備了6種國際參考物質(zhì)(InternationalReferenceReagents)[31]，分裝、凍干并以mol/L定值[32]。這些新制備的國際參考物質(zhì)比第三批、第四批HCG國際標(biāo)準(zhǔn)品的純度有了很大的提高。2009年，Sturgeon[33]等調(diào)查了使用不同的測定方法對這6種參考物質(zhì)的測定結(jié)果,發(fā)現(xiàn)不同HCG測定方法在識別不同形式的HCG時(shí)有非常大的差異.他們調(diào)查的16種測試方法中，4種僅識別HCG，6種識別HCG及游離β亞基，6種識別HCG、HCGβ和β核心部分。他們認(rèn)為這些差

8、異是導(dǎo)致測定HCG時(shí)，不同方法間差異的主要原因。Cao和Rej[34]將完整的HCG和游離β-HCG單一或組合加入到的無HCG血清基質(zhì)中，制備出了含完整HCG、含hCGβ和含完整