HPLC法測定竹葉蘭根莖中竹

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1、HPLC法測定竹葉蘭根莖中竹葉蘭烷劉美鳳1,2,丁　怡3,杜力軍3(1.華南理工大學化工與能源學院,廣東廣州　510640;2.廣州奇星藥業(yè)有限公司,廣東廣州　510310;3.清華大學生物科學與技術系,北京　100084)摘　要:目的　利用反相高效液相對竹葉蘭干燥根莖中類化學成分竹葉蘭烷建立了快速、高效、穩(wěn)定的分析方法。方法　色譜柱:HypersilODS(150mm×4.6mm,5μm)不銹鋼柱,流動相:乙腈-水(35∶65),體積流量:1.0mL/min,柱溫:30℃,檢測波長:279nm,進樣量:10μL。結果　被測定峰與其他色譜峰可達到基線分離,線性范

2、圍0.80～2500μg,r=1,回收率及RSD分別為98.20%(RSD=0.66%),102.17%(RSD=0.45%),102.23%(RSD=1.22%)(n=5)。結論　建立了竹葉蘭烷的反相高效液相測定方法,本法簡便,準確,靈敏度高,可用于定量測定和質量控制。關鍵詞:反相高效液相色譜;竹葉蘭;竹葉蘭烷中圖分類號:R282.6　　　文獻標識碼:A　　　文章編號:0253-2670(2008)03-0448-02　　竹葉蘭Arundinagraminifolia(D.Don)Hochr.為蘭科(Orchidaceae)竹葉蘭屬(ArundinaBl.)植

3、物,別名長桿蘭、草姜、山荸薺、竹蘭、禾葉竹葉蘭、文哈海(傣名),廣泛分布于熱帶和亞熱帶地區(qū),植物資源豐富,為西雙版納地區(qū)傣族人民常用的植物藥。其藥用部位主要為根莖,用于治療黃疸,熱淋,腳氣水腫,疝氣腹痛,風濕痹痛,胃痛,尿路感染,毒蛇咬傷,瘡癰腫毒,跌打損傷等[1]。初步的活性篩選結果顯示,竹葉蘭干燥根莖乙醇提取物具有較好抑制腫瘤細胞(Bel-7402和BGC-823)的活性,該提取物中主要為二苯乙烯類化合物,筆者首次對云南產(chǎn)竹葉蘭的干燥根莖進行了系統(tǒng)的化學成分研究,從其乙醇提取物中的醋酸乙酯部位分離得到1個新化合物竹葉蘭烷(arundinan)[2-(對-羥基

4、芐基)-3-羥基-5-甲氧基聯(lián)芐][2],該化合物為類化合物,也是竹葉蘭中主要的化學成分。本實驗建立了HPLC法測定竹葉蘭干燥根莖中竹葉蘭烷的量,為竹葉蘭中類成分的HPLC定量分析工作奠定基礎。1　儀器與材料Waters高效液相色譜儀(美國Waters公司,包括515泵,PAD996檢測器,7725i進樣器),KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。竹葉蘭根莖樣品采自云南省西雙版納地區(qū)(樣品編號:001205、010210、02041),經(jīng)中國科學院昆明植物研究所楊崇仁教授鑒定為A.graminifolia(D.Don)Hochr.。甲醇、乙腈(

5、色譜純,天津康科德科技有限公司),二次蒸餾水自制,竹葉蘭烷對照品自制,HPLC檢測質量分數(shù)98%以上,其他試劑均為分析純。2　方法與結果2.1　色譜條件:色譜柱為HypersilODS(150mm×4.6mm,5μm);流動相:乙腈-水(35∶65);體積流量:1.0mL/min;柱溫:30℃;進樣量:10μL;檢測波長:279nm。上述色譜條件下竹葉蘭烷的保留時間為7min左右。在該色譜條件下待測組分可達到基線分離,見圖1。t/min1-竹葉蘭烷1-arundinan圖1　竹葉蘭烷對照品(A)和竹葉蘭干燥根莖(B)的HPLC圖Fig.1　HPLCChromat

6、ogramofarundinanreferencesubstance(A)anddriedtuberofA.graminifolia(B)2.2　對照品溶液的制備:精密稱取竹葉蘭烷對照品適量,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,配制成1.0mg/mL的對照品儲備溶液。2.3　供試品溶液的制備:竹葉蘭干燥根莖粉末(40～60目)200mg,精密稱定,置20mL樣品瓶中,加甲醇10mL,稱定質量,超聲提取20min,用甲醇補足清液,0.45μm微孔濾膜濾過,即得。2.4　線性關系考察:精密吸取竹葉蘭烷對照品儲備溶液適量,加甲醇溶液定量稀釋,分別配制成0.08、0.40、2

7、.00、10.00、50.00、250.00μg/mL的對照品溶液,上述溶液按色譜條件測定峰面積,以對照品的質量濃度為橫坐標(X),峰面積積分值為縱坐標(Y),進行線性回歸,回歸方程Y=4556.4X-9517,r=1,線性范圍0.80～2500μg。2.5　精密度試驗:同一供試品溶液10μL,重復進樣5次,測定峰面積,竹葉蘭烷峰面積的RSD分別為0.51%。2.6　重現(xiàn)性試驗:精密稱取同一批竹葉蘭干燥根莖粉末樣品5份,約0.2g,按2.3項供試品溶液的制備方法制得供試品溶液,進樣10μL,測定,測得峰面積,計算竹葉蘭烷質量分數(shù)為0.18%,RSD為0.87%,

8、表明該方法的重現(xiàn)性良好。