細菌簡單染色和革蘭氏染色

《細菌簡單染色和革蘭氏染色》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、實驗?zāi)康娜旧砣旧椒▽嶒灢牧蠈嶒瀮?nèi)容與步驟注意事項實驗結(jié)果一、實驗?zāi)康?.學(xué)習(xí)微生物涂片，染色原理和染色的基本操作技術(shù)，從而掌握微生物的一般染色法和革蘭氏染色法。2.鞏固顯微鏡（油鏡）的使用方法和無菌操作技術(shù)。二、染色原理由于微生物細胞含有大量水分，對光線的吸收和反射與水溶液的差別不大,機體是無色透明的，與周圍背景沒有明顯的反差,在普通光學(xué)顯微鏡下不易識別，必須對它們進行染色，使經(jīng)染色后的菌體與背景形成明顯的色差，從而能更清楚地觀察到其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。微生物細胞是由蛋白質(zhì)、核酸等兩性電解質(zhì)及其他化合物組成。所以，微生物細胞表現(xiàn)出兩性電解質(zhì)的性質(zhì)。兩性電解質(zhì)兼有堿性基和酸性基，在酸性

2、溶液中離解出堿性基呈堿性帶正電。在堿性溶液中離解出酸性基呈酸性帶負電。經(jīng)測定，細菌等電點pH在2-5之間，故在中性、堿性或偏酸性溶液中，細菌的等電點均低于上述溶液的pH值，所以細菌帶負電荷，容易與帶正電荷的堿性染料結(jié)合，故用堿性染料染色的較多。微生物體內(nèi)各結(jié)構(gòu)與染料結(jié)合力不同，故可用各種染料分別染微生物的各結(jié)構(gòu)以便觀察。三、染色方法(一)簡單染色法簡單染色法又叫作普通染色法，只用一種染料使細菌染上顏色，如果僅為了在顯微鏡下看清細菌的形態(tài)，用簡單染色即可。(二)復(fù)染色法用兩種或多種染料染細菌，目的是為了鑒別不同性質(zhì)的細菌，所以又叫鑒別染色法。主要的復(fù)染色法有革蘭氏染色法和抗酸性染色法

3、。革蘭氏染色法：不僅能觀察到細菌的形態(tài)，而且還可將所有細菌區(qū)分為兩大類：染色反應(yīng)呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌，用G+表示；染色反應(yīng)呈紅色（復(fù)染顏色）的稱為革蘭氏陰性細菌，用G-表示。細菌對革蘭氏染色的不同反應(yīng)，是由于它們細胞壁的成分和結(jié)構(gòu)不同而造成的。四、實驗材料1.顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、接種環(huán)、載玻片、酒精燈等。2.石炭酸復(fù)紅染液、草酸銨結(jié)晶紫染液、碘液、95％乙醇、番紅（沙黃）染液3.菌種：表皮球菌、變形桿菌五、實驗內(nèi)容與步驟(一)細菌的簡單染色步驟涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→鏡檢1．涂片取干凈的載玻片于實驗臺上，在載玻片的中央滴一滴無菌蒸餾水，將接種

4、環(huán)在火焰上燒紅，待冷卻后從斜面挑取少量菌種(表皮球菌或變形桿菌)與玻片上的水滴混勻后，在載玻片上涂布成一均勻的薄層，涂布面不宜過大。2．干燥涂片最好在室溫下使其自然干燥，有時為了使之干得更快些，可將標本面向上，手持載玻片一端的兩側(cè)，小心地在酒精燈上高處微微加熱，使水分蒸發(fā)，但切勿緊靠火焰或加熱時間過長，以防標本烤枯而變形。3．固定固定常常利用高溫，手持載玻片的一端，標本向上，在酒精燈火焰外層盡快的來回通過2~3次，共約2~3秒鐘，并不時以載玻片背面加熱觸及皮膚，不覺過燙為宜（不超過60℃）,放置待冷后，進行染色。4．染色在涂片薄膜上滴加染色液(石炭酸復(fù)紅、草酸銨結(jié)晶紫或美藍任選一種

5、)一滴，使染色液覆蓋涂片，染色約1min。5．水洗斜置載玻片，在自來水龍頭下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。6．干燥用吸水紙吸去涂片邊緣的水珠，置于室溫下自然干燥。用吸水紙時切勿將菌體擦掉。7．鏡檢用顯微鏡觀察，并用鉛筆繪出細菌形態(tài)圖。(二)細菌的革蘭氏染色步驟涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脫色→水洗→復(fù)染→水洗→干燥→觀察1．取表皮球菌和變形桿菌(均以無菌操作)分別在同一張載玻片上做涂片、干燥、固定，方法均與簡單染色的相同。2．用草酸銨結(jié)晶紫染色1min后水洗。3．加碘液媒染1min后水洗。4．斜置載玻片，滴加95％乙醇脫色，至流出的乙醇不現(xiàn)紫色為止，大約需時

6、20~30s，隨即水洗。5．用沙黃染液復(fù)染1min，水洗。6．用吸水紙吸掉水滴，待標本片干后置顯微鏡下，用低倍鏡觀察，發(fā)現(xiàn)目的物后用油鏡觀察，注意細菌細胞的顏色。繪出細菌的形態(tài)圖并說明革蘭氏染色的結(jié)果。六、注意事項1．革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是脫色時間，如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而被誤認為革蘭氏陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被誤認為是革蘭氏陽性菌。因此必須嚴格把握脫色時間。2．選用培養(yǎng)18-24小時菌齡的細菌為宜，若細菌太老，由于菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌轉(zhuǎn)呈陰性反應(yīng)。思考題1．作革蘭氏染色涂片為什么不能過于濃厚？其染色成敗的關(guān)鍵一步是什么？2．通過革蘭氏染色，你

7、認為它在微生物學(xué)中有何實踐意義？七、實驗結(jié)果簡單染色：表皮球菌和變形桿菌染成（）色。革蘭氏染色（變形桿菌與表皮球菌）；將結(jié)果填于下表中實驗細菌的芽孢染色法和鞭毛染色法一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)并掌握芽孢染色方法。初步了解芽孢桿菌的形態(tài)特征。學(xué)習(xí)并初步掌握鞭毛染色法，觀察細菌鞭毛的形態(tài)特征。二、實驗原理1.芽孢染色法原理芽孢染色法是利用細菌的芽孢和菌體對染料的親合力不同的原理，用不同染料進行著色，使芽孢和菌體呈不同的顏色而便于區(qū)別。芽孢壁厚、透性低，著色、脫色均較困難，因此，當先