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1、蟑螂的抗藥性實驗任東升中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所E-mail：rendongsheng@sohu.com2009年12月3日提綱°蟑螂抗藥性的測定方法?藥膜法?點滴法°蟑螂點滴法抗藥性測定中的實驗要點°生物測定的基本原則°滅蟑餌劑的藥效評價方法探討蟑螂生測方法°針對觸殺性滅蟑殺蟲劑的生物測定方法：?WHO推薦的藥膜法?國內使用較多的還有點滴法蟑螂抗藥性監(jiān)測方案°2008年4月22日，媒介生物學及控制分會蟑螂學組組織相關專家討論草擬了《蟑螂抗藥性監(jiān)測方案》，方案包含了蟑螂抗性監(jiān)測的藥膜法和點滴法。WHO
2、蟑螂抗藥性測定：藥膜法°這個方法是測量蟑螂種群對給定一種殺蟲劑的敏感性水平。這個技術設計用來檢測一個殺蟲劑抗性品系是否出現(xiàn)，什么時候出現(xiàn)。°藥膜法優(yōu)缺點：?優(yōu)點：簡便、實用；?缺點：不如點滴法的結果精確。建立基線°把一批蟑螂放在用標準殺蟲劑制作的廣口藥膜瓶中，觀察擊倒率。通過這個試驗結果，我們能夠得到擊倒50％和95％所需的時間，即LT50和LT95。每次試驗要做5個重復，每個重復約10只試蟲?！氵@個試驗應該在不同的地點、不同的季節(jié)多次進行。實驗條件°試蟲：試驗最好用蟑螂雄成蟲。如果不能得到足夠多的雄性，也可以
3、通過雌蟲和若蟲的試驗來得到敏感性的信息?！阍囼灄l件：試驗應該在沒有被殺蟲劑污染的房間里進行。蟑螂試驗的房間溫度20℃到30℃之間，相對濕度保持在25％以上。試劑盒的組成：?50ml用丙酮溶解的0.5%狄氏劑、1.0%馬拉硫磷、0.5%二嗪農、0.1%殘殺威的母液。?4瓶丙酮溶液，每瓶50ml?4個10ml的量筒?3個5ml刻度吸量管?6個玻璃廣口瓶，容量大約500ml?1瓶凡士林?1瓶石蠟油?一套說明說明書，一套報表，6張對數(shù)機率格紙測繪回歸線操作程序1.蟑螂應該盡可能的從一個地方收集，飼養(yǎng)在一個容器中直到被使
4、用。2.加1ml的母液到9ml的丙酮溶液中稀釋。每個廣口瓶中放入2.5ml的稀釋液。水平轉動這個廣口瓶，讓稀釋液均勻的覆蓋在廣口瓶壁和底部，直到丙酮完全揮發(fā)。一般來說，下午處理瓶子，第二天早晨使用比較方便。3.在瓶口內側均勻涂抹凡士林和石蠟油等比例混合物，防止蟑螂逃逸。這種礦物油的混合物加熱的時候更容易混合。4.每個廣口瓶中放10個蟑螂，按照記錄表中的要求每隔一定時間記錄擊倒時間。在每一個觀察試驗中，直到記錄90－100％的蟑螂被擊倒。如果24小時后仍有存活，放一片馬鈴薯作為食物。蟑螂返回正常姿勢不能爬行被認為
5、是擊倒。實驗數(shù)據(jù)的處理°先在實驗室的敏感種群進行上述試驗，結果記錄在附件表中。°蟑螂對有機氯的抗性LT50多超過72小時。°如果用氨基甲酸酯類殺蟲劑，試驗應該持續(xù)5天，因為氨基甲酸酯類殺蟲劑的抗性表現(xiàn)為蟑螂可能被擊倒，但幾天之后會恢復，因此在這種試驗中記錄恢復的蟑螂數(shù)量，計算LT50的時候，最初的擊倒數(shù)目應當減去恢復的數(shù)目。實驗數(shù)據(jù)的處理：對數(shù)-概率紙°實驗者通過選定的濃度的四個重復試驗，可以得到時間－擊倒的回歸線?！阍囼灲Y果應該在提供的對數(shù)－概率紙上畫點作圖?；貧w曲線通過眼睛觀察作圖，通過圖表讀取LT50和L
6、T95?！氵@條回歸線的LT50不應當超過最高的擊倒數(shù)。藥膜法濃度的確定°藥膜法在使用過程中如何確定使用藥膜的濃度？?WHO診斷試劑盒中推薦濃度：0.05%狄氏劑、0.1%馬拉硫磷、0.05%二嗪農、0.01%殘殺威；?一般情況下，丙酮為溶劑將各種殺蟲原液配制成0.05%稀釋液即可；?根據(jù)實際情況，按照殺蟲劑推薦使用的濃度做藥膜的濃度。蟑螂抗藥性測定：點滴法°點滴法是基本的生物測定方法之一。°點滴法的優(yōu)缺點：?優(yōu)點：精確，可以得到定量的數(shù)據(jù)；?缺點：工作量比藥膜法大，要得到一個合適的數(shù)據(jù)可能需要反復多次實驗?！阋?/p>
7、蟑螂生測簡要說明點滴法的操作程序。蟑螂點滴法生物測定°生物測定的程序：?準備飼養(yǎng)條件：燒杯、飼料、水、封口紗布；?準備試蟲：按照實驗數(shù)量要求捕捉足夠數(shù)量的試蟲；?殺蟲劑系列濃度的配制：按照實驗要求系列配制殺蟲劑溶液；?試蟲麻醉和點滴處理；?記錄實驗結果：24小時后記錄實驗結果；?數(shù)據(jù)處理：求LD50，單位ug/頭。如何確定殺蟲劑濃度范圍°可以根據(jù)文獻資料和殺蟲劑的性質估計殺蟲劑LD50的區(qū)間范圍；°采用10倍系列稀釋的方法，得到試蟲全死和全活的區(qū)間。高效氯氰菊酯預實驗結果：試蟲為蟑螂雄成蟲,點滴器為1.04uL
8、濃度（ug/mL）00.1110100100010000總蟲數(shù)109111010109死蟲數(shù)000510109如何確定殺蟲劑濃度范圍編號CK12345濃度ug/mL010033113.71.2結果預期：?最好死亡率在10%~90%之間有5個濃度；?最少死亡率在10%~90%之間有3個濃度；?死亡率高于和低于50%都有濃度。不能滿足上述條件，需要調整濃度范圍重新測試。正常情況做2~3次可
