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《冰凍對精子dna的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、·253·第8卷第4期中華男科學Vol.8No.42002年8月NationalJournalofAndrologyAug.2002·論著·冰凍對精子DNA的影響宋博,鄭履康,鄧麗霞,張橋(中山醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院遺傳毒理研究室,廣東廣州510089)摘要:目的:探討冰凍是否引起精子DNA損傷。方法:采用改進后的單細胞凝膠電泳法(SCGE)對-80℃條件下保存不同時間的精子DNA進行分析。結(jié)果:以DNA頭部百分比為檢測參數(shù),方差分析顯示,對于時間因素,P>0.05,無統(tǒng)計學差異。結(jié)論:冰凍不引起精子DNA損傷。
2、關(guān)鍵詞:冰凍;精子;DNA;單細胞凝膠電泳法中圖分類號:R321.1文獻標號:A文章編號:100923591(2002)0420253202XFreezingEffectonSpermDNABoSONG,Lü2KangZHENG,Li2XiaDENG,QiaoZHANG(DepartmentofGeneticResearch,SunYat2SanUniversityofMedicalScience,Guangzhou,Guangdong510089,China)Abstract:Objectives:Toass
3、esstheeffectoffreezingonthespermDNA.Methods:ToassessthespermDNApreservedat-80℃byusingthesinglecellgelelectrophoresis(SCGE).Results:Therewasnostatisticaldifferenceonthetimefactorbyanal2ysisofvariance(ANOVA).Conclusions:IntegrityofspermDNAcouldnotbedevastatedi
4、nfrozenstates.NatlJAndrol,2002,8(4):253～254Keywords:Freezing;Sperm;DNA;Singlecellgelelectrophoresis在生殖遺傳學實驗中,由于精液取材困難,通常6精子密度(61～197)×10/ml,平均(123±48)×對精液標本不做特殊處理,直接于冰凍條件下保610/ml,;a級精子30%～60%,平均(49±10)%。[1]存。隨著生殖醫(yī)學的發(fā)展,精子的超低溫保存已所有捐精者均無煙酒史,無放射線接觸史。[2,3]成為相對成熟穩(wěn)
5、定的技術(shù)。大量的文獻對于精1.2實驗材料低熔點瓊脂糖(LAM)、正常熔點液的保存條件、保存方式及冰凍復蘇等問題進行了瓊脂糖(NAM)、肌氨酸鈉、溴化乙錠(EB)購自Sig2研究,但是目前少有人對精子冰凍后DNA成分的ma公司。蛋白酶K購自Merck公司。余試劑購自變化進行分析,本實驗目的在于,采用改進后的單細廣州化學試劑廠。電泳儀為北京六一儀器廠DYY2胞凝膠電泳法(singlecellgelelectrophoresis,7B型電泳儀,熒光顯微鏡為德國Zeiss。[4]SCGE),分析冰凍是否引起精子DNA的
6、損傷。1.3實驗方法將8份新鮮標本分裝,150μl/管,于$80℃冰箱中保存。分別于當日(新鮮標1資料與方法本)、1個月、2個月取出標本(冰凍標本取出后立刻1.1一般資料人精液標本來源于廣東省計劃生放入37℃水浴箱內(nèi)解凍),用不含鈣、鎂離子的pH育研究所。捐精者年齡24～36歲,平均(31±4)歲;714PBS液洗滌2次,2000×g離心5min。PBS調(diào)X收稿日期:2001207213;修回日期:2002204219基金項目:中華醫(yī)學會(CMB)及廣東省自然科學基金資助(0013334)作者簡介:宋博(197
7、02),男,陜西西安市人,碩士,從事臨床生殖醫(yī)學及科研工作,現(xiàn)在北京大學深圳醫(yī)院生殖外科工作。E2mail:songbo58@163.com通訊作者:鄭履康·254·中華男科學2002年8月第8卷6細胞終濃度為(4～6)×10/ml。將PBS溶解的濃DNA損傷的影響。度為6.5g/LLAM與細胞懸液按照71∶比例于模具隨著生殖醫(yī)學的發(fā)展和精子庫的出現(xiàn),人們對內(nèi)混合,10℃放置8min。加入細胞裂解液[2.5精子的保存越加重視,目前多以液氮為儲存劑,以甘mol/LNaCl,100mmol/LEDTA,10mmol
8、/LTris,油、DMSO等為保護劑,采用逐步降溫法于超低溫[6]10g/L肌氨酸鈉,pH10,臨用前加10g/LTritonX2狀態(tài)下保存精子。普通實驗中通常將精液標本100,10%(V/V)DMSO],10℃放置1h。吸去殘直接低溫保存。一般認為冰凍條件下DNA比較穩(wěn)[7]液,加入酶消化液(2.5mol/LNaCl,5mmol/LTris,定,其完整性不會被破壞。Steele等對冰
