沙眼衣原體核酸檢測試劑盒

《沙眼衣原體核酸檢測試劑盒》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、沙眼衣原體核酸檢測試劑盒（PCR?熒光探針法）【名稱】通用名稱：沙眼衣原體核酸檢測（PCR-熒光探針法）英文名稱：DiagnosticforChlamydiaTrachomatisDNA（PCR—FluoresecenceProbing）【包裝規(guī)格】20人份/盒【預(yù)期用途】本產(chǎn)品川于丿來道或女性陰道分泌物標(biāo)本屮的沙眼衣原體核酸定性檢測，適用于沙眼衣原體（CT）感染的輔助診斷，不能用于沙眼衣原體感染的篩杏，僅限用于經(jīng)衛(wèi)生行政機構(gòu)認(rèn)可的醫(yī)療單位的試驗室?！緳z驗原理】本產(chǎn)品用一対沙眼衣原體特界性引物和沙眼衣原體特界性熒光探針，配以PCR反應(yīng)液、耐熱dn

2、a聚合酶（Taq酶）、核昔酸單體（dNTPs）等成分，用PCR體外擴增法檢測沙眼衣原體DNA?！局饕M成成份】組份部分?jǐn)?shù)量主要組成成份DNA提取液（500u1/管）2管NaOH、Tris—HC1(PH8.0)、TritonX—100.NP—40、EDTA(P118.0)、Chelex—100PCR反應(yīng)管/蓋（耒貼標(biāo)簽）20管CT-PCR反應(yīng)液、Taq酶系和固體封蓋劑陰性質(zhì)控品（250U1/管）1管無菌生理氯化鈉溶液臨界陽性質(zhì)控品（50?1/管）1管滅活的CT培養(yǎng)液（25個CT顆粒/u1）強陽性質(zhì)控品（50111/管）1管滅活的CT培養(yǎng)液（2500

3、個CT顆粒51）【儲存條件及有效期】于-20°C，避免反復(fù)凍融；有效期6個月?！具m用儀器】DA—620熒光檢測儀，ABIPrism7000,ABIGeneAmp5700,RocheLightCycler>Mx3000P熒光定量PCR儀等?！緲颖疽蟆磕行裕喝∧虻婪置谖锘蚣毿∶奘米由烊肽虻兰s2?4厘米，略捻動拭子取出分泌物（應(yīng)略帶黏膜）。將分泌物或棉拭子置入無菌玻璃管，用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后，密閉送檢。女性：陰道-用無菌生理氯化鈉溶液棉球洗去宮頸外分泌物，再用無菌棉拭子插入宮頸內(nèi)，停5秒鐘示旋動棉拭了采集宮頸分泌物，將棉拭了置入無菌玻璃管，用無菌棉

4、球?qū)⒃嚬苋o后，密閉送檢。尿道一用無菌生理氯化鈉溶液棉球洗凈尿道口，再用無菌棉拭子插入尿道約2厘米,略捻拭了取出分泌物，將棉拭了置入無菌玻璃管（應(yīng)略帶黏膜）。川無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后，密閉送檢。標(biāo)本可立即用于測試，也可保存于一20°C待測，保存期為6個月。標(biāo)本運送應(yīng)采用0°C冰壺。并于48小時內(nèi)送達?！緳z驗方法】標(biāo)木及對照品的處理標(biāo)本試管中加入1ml無菌生理氯化鈉溶液1ml打勻，12,000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，再重復(fù)洗滌一次。沉淀直接加50P1DNA提取液充分混勻，（提取液內(nèi)含不溶于水的物質(zhì)，取樣時盂用加樣器充分混勻后吸取。如出現(xiàn)因吸頭嘴部太細不能吸

5、取或取樣后堵塞吸頭的現(xiàn)象，可先用潔凈無污染的剪刀將吸頭嘴部剪去一截。）沸水浴10分鐘（誤差不超過1分鐘），轉(zhuǎn)至4°C靜置6?8小時以保證充分裂解。12,000轉(zhuǎn)/分離心2分鐘，取上清液2U1做PCR反應(yīng)。另取陰性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各5（）n1加等彊DNA提取液充分混勻，沸水浴10分鐘示同上處理。2PCR擴增2.1DA-620儀器熒光檢測操作取單管單人份PCR反應(yīng)管若干管，直接加入處理后樣品（或陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品）2叮，，6,00（）轉(zhuǎn)/分離心數(shù)秒。將反應(yīng)管放入PCR儀，按下列條件擴增：93°C預(yù)變性2分鐘，然后按93°C45秒一55°C120

6、秒，反應(yīng)10個循環(huán)后置33°C保溫，迅速逐個將反應(yīng)管放入熒光檢測儀，讀取并記錄讀數(shù)A0。熒光激發(fā)波長為487nm,檢測波長為525nmo最后按93°C45秒->55°C120秒，共做30個循環(huán)后置33°C保溫。使用PE9600,9700,2400儀器循環(huán)參數(shù)為93°C30秒->55°C60秒，其它儀器循環(huán)參數(shù)為93°C45秒->55°C120秒。PCR反應(yīng)后熒光檢測，待各PCR管充分冷卻至33°C后，迅速逐個將反應(yīng)管放入熒光檢測儀，讀収并記錄讀數(shù)ATo熒光激發(fā)波長為487nm,檢測波長為525nm。2.2ABIPrism7000,ABIGeneA

7、mp570（）操作將反應(yīng)管放入PCR儀器的孔反應(yīng)槽內(nèi)，按對應(yīng)順序設(shè)置陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品以及未知標(biāo)本，并設(shè)置樣品名稱、標(biāo)記熒光基團種類和循環(huán)條件：ABIPrism7000,ABIGeneAmp5700的循環(huán)條件：93°C預(yù)變性2分鐘，然后按93°C45秒一55°C60秒，先做10個循壞，最后按93°C30秒一55°C45秒,做30個循環(huán)。3RocheLightCycler操作將處理后的樣品（或陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品）2U1加入專用毛細管中，蓋上PCR反應(yīng)蓋&000轉(zhuǎn)/分離心2分鐘，插入関形卡盤倒置10秒鐘后放入儀器中設(shè)置循環(huán)條件:93°C預(yù)變性

8、2分鐘,然后按93°C5秒->57°C45秒,做40個循環(huán).所有設(shè)置全部完成后保持穩(wěn)健，最后運行程序。4結(jié)果分析條件的設(shè)定DA-620的