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1、生物醫(yī)學(xué)工程研究2009,28(2):116～118JournalofBiomedicalEngineeringResearch肌肉注射脂聯(lián)素基因?qū)Ω咧?食大鼠氧化應(yīng)激作用的影響12△111范穎,蘇本利,孟秀香,劉丹丹,劉奔(1.大連醫(yī)科大學(xué)診斷學(xué)試驗中心,大連116045;2.大連醫(yī)科大學(xué)附屬二院內(nèi)分泌科,大連116027)摘要:構(gòu)建人脂聯(lián)素(hAPN)基因的質(zhì)粒表達(dá)載體,研究其體外轉(zhuǎn)移后的表達(dá)情況。通過基因重組構(gòu)建脂聯(lián)素基因表達(dá)系統(tǒng),電轉(zhuǎn)導(dǎo)法導(dǎo)入大鼠股部肌肉,RT-PCR檢測大鼠肌肉注射部位組織中mRNA水平的表達(dá)情況,同時監(jiān)測外周血中SOD、MDA水平。結(jié)果表明:RT-PCR顯示
2、該基因能在肌肉組織中表達(dá),血清中SOD水平相應(yīng)升高,注射后兩周達(dá)到最高水平;MDA水平降低,注射兩周后達(dá)到最低水平,持續(xù)大約兩周。脂聯(lián)素表達(dá)系統(tǒng)可以在動物體內(nèi)表達(dá),增加了自由基的清除,抑制了脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生。關(guān)鍵詞:脂聯(lián)素;氧化應(yīng)激;超氧化物歧化酶(SOD);丙二醛(MDA)中圖分類號:R318文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:167226278(2009)0220116203TheEffectofTransferredHumanAdiponectinGeneonOxidationStressofRatsFedwithHigh2fatFood12111FANYing,SUBenli,MENGXi
3、uxiang,LIUDandan,LIUBen(1.LaboratoryCenterofDiagnosisinDalianMedicalUniversity,Dalian116045,China;2.DepartmentofEndocrinology,TheSecondAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian116045)Abstract:ToconstructplasmidtransferredhumanAPNgeneandresearchhumanAPNexpressioninrats.HumanAPNexpressions
4、ystemwasconstructedbygenerecombination,transferedplasmidtoratmusclebyelectricalperforation;mRNAexpressionwasdetectedbyRT-PCR.SODandMDAlevelinplasmaweremonitored.ResultsshowedthatmRNAexpressedinratmuscle.SODlevelascendedaftergeneinjection,andreachedthehighestaftertwoweeks;MDAleveldescendedafterinj
5、ection,andwasthelowestaftertwoweeks.HumanAPNgenetransferresinplasmidexpressinratmuscle,andrestrainslipidperoxideproduce.Keywords:Adiponectin;Oxidationstress;Superoxidedismutase(SOD);Malondialdehyde(MDA)[2]肪酸與脂聯(lián)素水平的升高相關(guān)。研究證實,高脂1引言飲食可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)。MDA則是脂質(zhì)脂聯(lián)素(APN)是脂肪組織表達(dá)最豐富的蛋白質(zhì)過氧化反應(yīng)的主要代謝產(chǎn)物,在體內(nèi)的新陳代謝中產(chǎn)物
6、之一,其血漿濃度為5～30μgPml,約占總血漿起著重要作用,體內(nèi)SOD降低和MDA增高,可引起[1]蛋白的0.01%。肥胖、胰島素抵抗及冠心病時血自由基和活性氧等脂質(zhì)過氧化毒副產(chǎn)品的急劇增漿中APN水平明顯低于正常人。在針刺治療單純多,從而導(dǎo)致氧化和脂質(zhì)過氧化損傷而誘發(fā)各種疾[3-5]肥胖的研究中,針刺后血漿脂聯(lián)素水平增高,同時游病。在APN轉(zhuǎn)基因小鼠中,脂聯(lián)素的過度表達(dá)[6]離脂肪酸、膽固醇、胰島素是降低的,降低的游離脂成為預(yù)防糖尿病和動脈粥樣硬化的保護(hù)性因素。3大連市科技局項目(2002B3NS136)△通信作者Email:mxxsu@sina.com第2期范穎,等:肌肉注射脂聯(lián)素
7、基因?qū)Ω咧嬍炒笫笱趸瘧?yīng)激作用的影響117本實驗將構(gòu)建質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠肌肉組織,以期獲得在脂飲食,自由食水。活體動物肌肉組織中人脂聯(lián)素基因的表達(dá)規(guī)律,為2.3.3動物標(biāo)本的留取轉(zhuǎn)染第三天,pLNCX2-進(jìn)一步研究APN的功能、調(diào)控機(jī)制及基因治療提供hAPN組、pLNCX2組分別取3只大鼠,斷頸處死,留基礎(chǔ)。取兩測股部肌肉,保存于-80℃冰箱中。三組實驗動物分別于轉(zhuǎn)染后一、二、三、四周,內(nèi)眥靜脈采血,2材料和方法分離血清,保存于-20℃冰
