發(fā)酵工業(yè)菌種

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1、第二章發(fā)酵工業(yè)菌種本章內(nèi)容§1菌種篩選§2菌種改良一、常用的工業(yè)微生物二、發(fā)酵工業(yè)菌種分離篩選§1菌種篩選一、常用的工業(yè)微生物p131、細(xì)菌醋桿菌屬的醋化醋桿菌、弱氧化醋桿菌乳酸桿菌枯草桿菌乳酸桿菌醋化醋桿菌枯草桿菌1、細(xì)菌丙酮丁醇梭菌大腸桿菌谷氨酸棒狀桿菌丙酮丁醇梭菌谷氨酸棒狀桿菌2、酵母菌釀酒酵母假絲酵母屬產(chǎn)朊假絲酵母解脂假絲酵母熱帶假絲酵母畢赤酵母屬、漢遜酵母屬一、常用的工業(yè)微生物釀酒酵母熱帶假絲酵母熱帶假絲酵母產(chǎn)朊假絲酵母3、霉菌曲霉屬米曲霉黑曲霉青霉屬青霉菌：點(diǎn)青霉、產(chǎn)黃青霉桔青霉一、常用的工業(yè)微生

2、物青霉屬產(chǎn)黃青霉曲霉屬米曲霉黑曲霉3、霉菌根霉屬:德氏根霉米根霉、小麥曲根霉紅曲霉屬紫紅曲霉根霉屬米根霉4、放線菌鏈霉菌屬小單孢菌屬地中海諾卡氏菌一、常用的工業(yè)微生物5、未培養(yǎng)微生物p14※定義：指迄今所采用的微生物純培養(yǎng)分離及培養(yǎng)方法還未獲得純培養(yǎng)的微生物。其在自然環(huán)境微生物群落中占有非常高的比例，約為99％。一、常用的工業(yè)微生物二、發(fā)酵工業(yè)菌種分離篩選P15菌株分離：將混雜著各種微生物的樣品按照實(shí)際需要和菌株的特性采取迅速、準(zhǔn)確、有效的方法對它們進(jìn)行分離、篩選，進(jìn)而得到所需微生物的過程。※（一）、菌種選擇

3、的要求p15培養(yǎng)基原料來源廣、產(chǎn)物易回收發(fā)酵周期較短；條件易控制；抗病毒（噬菌體）、雜菌能力強(qiáng)；菌種不易變異退化；對放大設(shè)備的適應(yīng)性強(qiáng)；菌種不是病原菌（二）、菌種分離的一般過程P15標(biāo)本采集→預(yù)處理→富集培養(yǎng)→菌種分離（初篩、復(fù)篩）→發(fā)酵性能鑒定如何使樣品中所含微生物的可能性大？如何在后續(xù)的操作中使這種可能性實(shí)現(xiàn)？目的：高效地獲取一株高產(chǎn)目的產(chǎn)物的微生物問題：→菌種保藏1、樣品的采集p15樣品來源越廣泛，獲得新菌種的可能性越大?！蓸訒r(shí)應(yīng)注意的問題:A、土壤的有機(jī)質(zhì)含量和通風(fēng)狀況B、土壤的酸堿度和植被狀況C、

4、地理?xiàng)l件D、季節(jié)條件A、土壤的有機(jī)質(zhì)含量和通風(fēng)狀況P16耕地、菜園、近郊土壤：土質(zhì)通氣保水性能好，微生物生長旺盛，數(shù)量多，尤其細(xì)菌和放線菌較多山坡上的森林土壤：有機(jī)質(zhì)豐富，微生物生陰暗潮濕，適合霉菌和酵母菌生長沙土、貧瘠的土地：細(xì)菌數(shù)量少果園：樹根土壤中酵母菌含量較高（偏酸）豆科植物根系土壤：根瘤菌較多B、土壤的酸堿度和植被狀況腐殖土：霉菌較多油田土壤：分解石油的微生物較多自然環(huán)境中的天然菌群，可因人類的生產(chǎn)或生活而改變。如在土壤中加去莠津（2-氯-4-乙胺基-6-異丙胺基-1,3,5-三嗪），會導(dǎo)致放線菌群

5、的增加；在殺真菌劑存在下，諾卡氏菌屬的菌更容易分離到。C、地理?xiàng)l件南方溫度高、溫暖季節(jié)長、雨水多、相對濕度高、植被覆蓋面廣、土壤有機(jī)質(zhì)豐富：許多工業(yè)微生物菌種，如抗生素產(chǎn)生菌，尤其是霉菌、酵母菌，大都從南方獲取北方：秋季采土樣最為理想D、季節(jié)條件上節(jié)知識回顧一、常用的工業(yè)微生物二、發(fā)酵工業(yè)菌種分離篩選1、樣品的采集A、土壤的有機(jī)質(zhì)含量和通風(fēng)狀況B、土壤的酸堿度和植被狀況C、地理?xiàng)l件D、季節(jié)條件采土樣的方法南方：用取樣鏟，將表層5cm（陽光直射，蒸發(fā)量大水分少，而且受紫外線照射）左右的浮土除去，取5～25cm處

6、的土樣10～25g，裝入事先準(zhǔn)備好的塑料袋內(nèi)扎好。北方：土壤干燥，可在10～30cm處取樣。給塑料袋編號并記錄地點(diǎn)、土壤質(zhì)地、植被名稱、時(shí)間及其他環(huán)境條件。一般樣品取回后應(yīng)馬上分離，以免微生物死亡。目的：提高菌種分離的效率?！裎锢矸椒ǎ杭訜?55℃,6min；100℃,1h；40℃2-6h)、膜過濾法、離心法、空氣攪拌法●化學(xué)方法：含1%幾丁質(zhì)培養(yǎng)基、用CaCO3提高pH值進(jìn)行培養(yǎng)（鏈霉菌屬）●誘餌法：用涂石蠟的棒置于碳源培養(yǎng)基中（諾卡氏菌）、花粉（游動放線菌）、蛇皮（小瓶菌屬）、人頭發(fā)（角質(zhì)菌屬）2、樣品的

7、預(yù)處理p16富集的目的：讓目的微生物在種群中占優(yōu)勢，使篩選變得可能。富集培養(yǎng)是在目的微生物含量較少時(shí)，根據(jù)微生物的生理特點(diǎn)，設(shè)計(jì)一種選擇性培養(yǎng)基或創(chuàng)造有利生長條件，使目的微生物數(shù)量增加，由原來自然條件下的劣勢種變成人工環(huán)境下的優(yōu)勢種，以利于分離得到所需要的菌株。3、富集培養(yǎng)p17富集的基本方法：1、控制營養(yǎng)：如以唯一碳源或氮源作底物；2、控制培養(yǎng)條件：如pH、溫度、通氣量等；3、抑制不需要的種類。富集培養(yǎng)方法：1、分批式富集培養(yǎng)（P17）：指將富集培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到新的同一種培養(yǎng)基中，重新建立選擇性壓力，如此重復(fù)幾

8、次后，再取此富集培養(yǎng)物接種至固體培養(yǎng)基上，以獲得單菌落。轉(zhuǎn)種是關(guān)鍵。2、連續(xù)培養(yǎng)（P17）：通過改變限制性基質(zhì)濃度，來控制兩類不同菌株的比生長速率。3、半連續(xù)培養(yǎng)（P18）：即分批補(bǔ)料培養(yǎng)4、菌種分離P18從產(chǎn)物角度出發(fā)在培養(yǎng)時(shí)以產(chǎn)物的形成有目的的設(shè)計(jì)培養(yǎng)基；利用簡單、快速的鑒定方法，如抗生素。從形態(tài)的角度菌落的外觀形態(tài)，是微生物的一個(gè)重要表征。如多糖產(chǎn)生菌在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上生長，從具有粘液性的菌落外