羥基自由基和超氧陰離子自由基測定的熒光分析法研究

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1、山東農業(yè)大學碩士學位論文羥基自由基和超氧陰離子自由基測定的熒光分析法研究姓名：馬淑慧申請學位級別：碩士專業(yè)：應用化學指導教師：高吉剛;周杰20090613山東農業(yè)大學碩士學位論文中文摘要生命活動的代謝過程中不斷產生各種活性氧自由基(ROS)，羥基自由基(·0H)，超氧自由基(02e")是其中具有代表性的兩種自由基，它們與生物體的衰老及許多疾病的發(fā)生都有重要關系。·OH是一種氧化能力很強的自由基，能很容易地氧化各種有機物和無機物，氧化效率高，反應速率快，是造成組織脂質過氧化、核酸斷裂、蛋白質和多糖分解的活性氧，與機體的衰老、腫

2、瘤、輻射損傷和細胞吞噬有關。02·。不僅自身具有毒性，而且可以經過一系列反應生成其它活性氧自由基，進一步對生物體產生損傷作用，且停留時間較長。人體內總自由基中約95％以上屬于活性氧自由基，因此活性氧自由基的研究對人體有著特殊的意義。通過對活性氧自由基的檢測研究，可以幫助我們更好的解釋疾病產生的原因，加強有效的預防措施，減少機體的傷害程度。另外在衡量保健食品的抗氧化能力和中草藥抗氧化物質的篩選中具有重要的指導意義和理論價值?；钚匝踝杂苫磻詮?，存在時間短，不易進行直接測定。目前國內外已有較多間接測定·OH和02·‘的方法。本

3、研究在全面了解這些方法的基礎上，研究了利用熒光分析技術測定活性氧自由基的方法，因為此技術具有靈敏度高、選擇性好、操作簡便等優(yōu)點。本文合成了兩種新型熒光探針，同時對這兩種探針進行了檢測選擇性的研究，探討了部分抗氧化劑對活性氧自由基的清除作用。具體研究內容分為以下三點：(1)通過鳥苷與過氧化氫光解反應，形成熒光物質8．羥基鳥苷，分析8．羥基鳥苷在不同條件下存在的形式及不同存在形式與熒光強度的關系。探討羥基自由基產生及其與鳥苷反應的條件，根據(jù)熒光強度與羥基自由基的量效關系，研究羥基自由基與鳥苷作用的分子機理，探討茶葉提取液和大蒜提

4、取液通過清除羥基自由基對鳥苷的保護作用。(2)設計合成一種新的熒光探針試劑-2．(2’．吡啶亞胺甲基)苯酚，建立檢測02·。和SOD活性的熒光方法，研究測定方法的最佳條件，并用于大蒜、菠菜、木瓜中SOD活性的測定，并與鄰苯三酚自氧化法測定出的SOD活性進行了比較。(3)建立了一種以2．(2’．噻吩基)苯并噻唑啉為新型熒光探針測定羥基自由基和超氧陰離子自由基測定的熒光分析法研究02·’和SOD活性的熒光分析方法，探討了其它物質對體系的干擾影響及熒光探針的檢測單一性，研究測定方法的靈敏度，精密度，本法成功應用于大蒜、洋蔥等生物樣

5、品中SOD活性的測定。本論文首次對羥基自由基與鳥苷作用分子機理的熒光分析做了相關研究，并合成了新型熒光探針，用于02·‘和SOD活性的測定，且2．(2’．噻吩基)苯并噻唑啉對02·‘的檢測具有專一性，得到較為滿意的結果，但是也存在一些不足之處，如鳥苷與過氧化氫光解反應體系中測定·OH的含量時靈敏度還不夠高，還需進一步探討?；钚匝踝杂苫臏y定方法還未能很好的應用于動物體的檢測，有待進一步完善。關鍵詞：熒光分析法；羥自由基；超氧陰離子自由基；超氧化物歧化酶；熒光探針I(yè)I山東農業(yè)大學碩士學位論文ABSTRACTNumerousre

6、activeoxygenspecies(ROS)alegeneratedinthecourseofbiologymetabolism．Hydroxylradicals(·OH)，superoxideanionradical(02。‘)aretwotypicalones．Theyhaveimportantrelationswithaginganddiseases．·OHisafreeradical，whichhasahi曲oxidation．ItCanoxidizenumerousorganicandinorganiccomp

7、oundseasilywithhighoxidationefficiencyandfastreactionrate．Ithasrelationwithtumors，radiationdamagesandphagocytosis．02·‘hastoxicandCangenerateotherreactiveoxygenspeciesbyaseriesofreactions．Thesereactiveoxygenspecieshavefurtherdamagestoorganismsandlongresidenttime．Abo

8、ut95％ofthetotalfreeradicalsinthebodyarereactiveoxygenspecies；thereforetheresearchontheROShasaspecialsignificancetohumanbody．Researchesofreactiveo