復(fù)方芒果葉干膏抗肺纖維化作用及抗炎機(jī)制研究

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1、成都中醫(yī)藥大學(xué)二0一七屆博士研究生學(xué)位論文復(fù)方芒果葉干膏抗肺纖維化作用及抗炎機(jī)制研究TheStudyonAnti-pulmonaryFibrosisEffectandAnti-inflammatoryMechanismofDryExtractofCompoundMangoLeaves研究生姓名：劉穎指導(dǎo)教師：鄧家剛教授學(xué)科專業(yè)：中藥學(xué)二○一七年五月萬(wàn)方數(shù)據(jù)成都中醫(yī)藥大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要肺纖維化(Pulmonaryfibrosis，PF)是一種由多種因素引起的以彌漫性肺泡炎和肺泡結(jié)構(gòu)紊亂最終導(dǎo)致肺間質(zhì)纖維化為特征的疾病。該病的主要病理特點(diǎn)是早期以下呼吸道急性炎癥反應(yīng)

2、為主，并伴隨著大量成纖維細(xì)胞病理性增生轉(zhuǎn)型，導(dǎo)致后期某些細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellularmatrix，ECM)成分在肺泡和間質(zhì)內(nèi)沉積，纖維組織過(guò)度修復(fù)造成肺組織結(jié)構(gòu)的紊亂、肺泡損傷、膠原沉積，最終導(dǎo)致肺纖維化。隨著工業(yè)化的發(fā)展，肺纖維化發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，因其缺乏有效的治療手段，預(yù)后差、死亡率高，嚴(yán)重危害人類健康與生命。肺纖維化的發(fā)病機(jī)制欠清晰，其中炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)和膠原沉積是對(duì)肺纖維化發(fā)病機(jī)理的重要詮釋。目前臨床上以糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑治療為主，但只能在一定程度上緩解某些癥狀，不能從根本上逆轉(zhuǎn)和治療，也不能防御肺纖維化，并有不同程度的毒副作用。對(duì)于肺纖維

3、化，中醫(yī)藥以其豐富的臨床用藥經(jīng)驗(yàn)以及多成分、多靶點(diǎn)、多通路治療手段為特點(diǎn)，近年來(lái)受到了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的重視。復(fù)方芒果葉(Compoundmangoleaves，CML)干膏系廣西終身教授、名中醫(yī)鄧家剛主任醫(yī)師根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)擬定的治療肺纖疾患的復(fù)方。本研究以復(fù)方芒果葉干膏為研究對(duì)象，采用博萊霉素(Bleomycin，BLM)介導(dǎo)的肺纖維化動(dòng)物模型對(duì)其相關(guān)病理學(xué)、細(xì)胞因子、差異蛋白等進(jìn)行藥效與機(jī)制的探討，并利用細(xì)胞炎癥模型篩選復(fù)方芒果葉干膏有效抗炎物質(zhì)及研究復(fù)方對(duì)肺纖維化相關(guān)的炎癥通路的作用。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：1、復(fù)方芒果葉干膏抗肺纖維化藥效研究：運(yùn)用BLM氣管注射法

4、建立小鼠肺纖維化模型，觀察小鼠的整體情況、病理表現(xiàn)以及檢測(cè)肺組織中羥脯氨酸(Hydroxyproline，HYP)、相關(guān)細(xì)胞炎癥因子、相關(guān)抗氧化應(yīng)激因子的表達(dá)水平，從體內(nèi)水平上對(duì)復(fù)方芒果葉干膏抗炎、抗氧化以及抗纖維化藥效進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示，復(fù)方芒果葉干膏高劑量組小鼠呼吸逐漸平穩(wěn)、活潑好動(dòng)、毛色整齊有光澤、進(jìn)食正常、體重逐漸上升，中、低劑量組均有好轉(zhuǎn)。另外，復(fù)方芒果葉干膏高、中、低劑量組小鼠肺組織的肺指數(shù)均顯著性降低(P＜0.001)。以上提示：復(fù)方芒果葉干膏從整體水平上對(duì)肺纖維化小鼠的狀態(tài)和肺組織具有保護(hù)作用。病理觀察發(fā)現(xiàn)，蘇木精-伊紅染色法(Hematoxylin-

5、eosinstaining，HE)觀察模型組肺組織結(jié)I萬(wàn)方數(shù)據(jù)成都中醫(yī)藥大學(xué)博士學(xué)位論文構(gòu)破壞嚴(yán)重，損傷分布較廣，部分支氣管腔和肺泡腔內(nèi)可見(jiàn)大量炎性滲出物，中度至重度肺泡炎伴纖維組織增生及纖維化致肺實(shí)變，給藥組肺組織結(jié)構(gòu)清晰、形態(tài)正常，肺泡炎和肺纖維化明顯減少，未見(jiàn)彌漫性的炎癥和纖維化，肺泡間隔增厚不明顯。Masson染色可見(jiàn)高劑量組的纖維化程度明顯減少，中、低劑量組纖維化程度亦相應(yīng)減少。另外Szapiel評(píng)分結(jié)果顯示復(fù)方芒果葉干膏高、中、低劑量組小鼠肺組織的肺泡炎程度均顯著性降低(P＜0.001)，Ashcroft評(píng)分結(jié)果顯示復(fù)方芒果葉干膏高、中劑量組小鼠肺組織的纖

6、維化程度均顯著性降低(P＜0.001)。此外，經(jīng)過(guò)藥物干預(yù)后，復(fù)方芒果葉干膏高、中、低劑量組小鼠肺組織中HYP含量顯著性降低(P＜0.001)。以上提示：復(fù)方芒果葉干膏具有保護(hù)肺組織，明顯降低肺泡炎、膠原沉積以及肺纖維化的作用?？寡缀涂寡趸芯孔饔冒l(fā)現(xiàn)，復(fù)方芒果葉干膏高劑量組小鼠肺組織中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量均顯著性降低(P＜0.001或P＜0.01)；中劑量組小鼠肺組織中IL-6、TNF-α的含量均顯著性降低(P＜0.001或P＜0.05)。復(fù)方芒果葉干膏高、中、低劑量組小鼠肺組織中丙二醛(Malondialdehyde，MDA)水平顯著性降低(P＜

7、0.001)，超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)、總抗氧化能力(Totalantioxidantcapacity，T-AOC)水平均顯著性升高(P＜0.001或P＜0.01或P＜0.05)；高、中劑量組小鼠肺組織中還原型谷胱甘肽(Reducedglutathione，GSH)水平顯著性升高(P＜0.001)。結(jié)果提示：復(fù)方芒果葉干膏對(duì)肺纖維化具有良好的抗炎和抗氧化作用。2、復(fù)方芒果葉干膏抗肺纖維化機(jī)制研究：運(yùn)用同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量(isobarictagsforrelativeandabsolutequantific