栽培大豆和灘涂能的初步研究

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1、碩士學(xué)位論文栽培大豆和灘涂野大豆及其雜交后代苗期耐鹽性與NHX1基因功能的初步研究指導(dǎo)教教授師專業(yè)名稱細(xì)胞生物學(xué)研究方向植物逆境生物學(xué)答辯日期年四月IdentificationofSaltToleranceandFunctionAnalysisofNHX1GeneinGlycinemax^GlycinesojaandTheirHybridSeedlingsByZhouQihaoADissertationSubmittedtoNanjingAgriculturalUniversityInPartialFulfillmentofRequirementsfortheM

2、aster^DegreeSupervisedbyProf.YuBingjunDepartmentofPlantBiologyCollegeofLifeSciencesNanjingAgriculturalUniversityNanjing210095CompletedinApril,2010目錄摘要IAbstractI第一章文獻(xiàn)綜述1植物耐鹽機(jī)理及Na'/H"逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的分了生物學(xué)研究11植物耐鹽性生理機(jī)制研究11」鹽脅迫對(duì)植物的傷害11.2植物對(duì)鹽脅迫的適應(yīng)性12植物Nf/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的分子生物學(xué)研究及應(yīng)用32」細(xì)胞膜Na'/H'逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的克降及結(jié)構(gòu)

3、特征32.2液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的分子克隆及進(jìn)化分析32.3液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋口的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)及其特性52.4液泡膜Nf/TT逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋口的表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制62.5液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白與植物的耐鹽性73討論與展望84本研究的冃的和意義8第二章栽培大豆和灘涂野大豆及其雜交后代苗期耐鹽性鑒定111材料與方法121.1植物材料121.2方法122結(jié)果與分析142」NaCl脅迫對(duì)三人豆品種葉和根屮IC含量的影響142.2NaCl脅迫對(duì)三犬豆品種葉和根小Na*含量的影響142.3NaCl脅迫對(duì)三大豆品種葉和根中C「含量的影響152.4大豆DN

4、A提取及耐鹽標(biāo)記棊因PCR擴(kuò)增163討論17第三章栽培大豆和灘涂野大豆及其雜交后代中NHX1基因的克隆及其功能的初步分析191材料與方法201.1材料201.2實(shí)驗(yàn)方法232結(jié)果與分析312」半定量RT-PCR312.2亞細(xì)胞定位332.3M/X八基因的原核表達(dá)373討論40全文結(jié)論43倉(cāng)新性45存在問(wèn)題與展望45參考文獻(xiàn)47致謝52縮略語(yǔ)AmpAmpicillin氨節(jié)青霉素APSAmmoniumpersulfate過(guò)硫酸錢(qián)CTABCetyltriethylammnoniumbromide十六烷基三甲基滉化錢(qián)cDNAComplementaryDNA互補(bǔ)DNADE

5、PCDiethylprocarbonatc焦碳酸二乙脂EDTAEthylenediaminetetraceticacid乙二胺四乙酸GFPGreenfluorescentprotein綠色熒光蛋白IPTGIsopropylthio-p-D-galactoside異丙基硫代■卩?D—半乳糖昔KanKanamycin卡那霉素LBLuria-BcrtanimediumLB培養(yǎng)基ODOpticaldensity光密度MSMurashige-SkoogmediumMS培養(yǎng)基DWDryweight干重PBSPhosphatesodiumbuffer磷酸緩沖液PCRPolym

6、erasechainreaction聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RT-PCRReversetranscriptasc-PCR反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)SDSSodiumdodecylsulfate1?二烷基碩酸鈉SDS-PAGESodium-dodecyl-sulfate-polyacrylamide-ge1-electrophoresisSDS?聚丙烯酰胺凝膠電泳TEMEDN,N,N,N-tetramethylethyleuediamineN,N,N,N—四乙基乙二胺TrisTri-hydroxymcthy1aminomcthanc三坯甲基氨基甲烷X-gal5-bnno-4-ch

7、loro-3-indolyl-p-D-galactosidc5?漠氯?3?卩引味卩D?半乳糖昔bpBasepair堿基對(duì)摘要本研究以灘涂野大豆BB52種群、栽培大豆N23674品種及它們的雜交后代4076株系(F5代)幼苗為材料,用150n)mol?L“NaCl溶液脅迫不同吋間后,測(cè)定和分析葉和根中Nf、K+和含量變化。提取葉中DNA,通過(guò)抗鹽標(biāo)記基因PCR方法比較和分析了供試3大豆材料的耐鹽性差異。使用半定量RT-PCR方法分析了大豆葉和根中Na+/H+逆向運(yùn)轉(zhuǎn)蛋白基因NHX1mRNA水平的鹽脅迫響應(yīng)差異。分別構(gòu)建表達(dá)載體使AWX/基因在洋蔥表皮細(xì)胞及大腸桿菌

8、BL21中進(jìn)行表達(dá)。主要

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