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《高效液相色譜法測定大豆提取物中大豆異黃酮的含量》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、高效液相色譜法測定大豆提取物中大豆異黃酮的含量【摘要】奉文建立了大豆提取物中大豆界黃酮酌高效液相色譜測定方法.通過正變試驗(yàn)確定了樣品水解。最佳條件為：1.Otool/1HCl—MeOII溶解、80~C下、回流水解0.5h?釆用Nova—PakC1B3.9X150mm4ktni色譜枉，MeOH—0.4%P04(47：53V/V)為流動(dòng)相，流速0.7ml/min,檢測波長260nlll等色譜條件下洲定貳元含量。通過換算因子計(jì)算大豆異黃酮的含量。該方法快速、靈敏、重現(xiàn)性好，回收率達(dá)99%,變異系數(shù)小于3%。為產(chǎn)品的進(jìn)一步開發(fā)研
2、究打下了盤好基礎(chǔ)?！娟P(guān)鍵詞】大豆提取物；大豆異黃酮；黑蘭絲；正變設(shè)計(jì)法；方差分析；高效液和色譜法C、八0.刖S大豆由于富含多種生物活性物質(zhì)，一直是人們關(guān)注的熱點(diǎn)。隨著現(xiàn)代研究的不斷深入，大豆異黃酮防治心腦血管疾病，預(yù)防乳腺癌和骨質(zhì)疏松癥，改善更年期癥狀等作川逐步被人們所認(rèn)知。目前,國內(nèi)已有十多家企業(yè)對其進(jìn)行研究、生產(chǎn),但檢測方法各異。采用測定黃酮化合物的比色分析法，樣站中有其他色索的干擾;紫外分光光度法雖然方便、快速，但不能測世單一成分，只樣品處理不當(dāng)會(huì)冇雜質(zhì)干擾。鑒于此，冇必要研究一種可靠的人豆異黃酮的含量檢測分析方法
3、。人豆異黃酮是多酚類混合物，人豆異黃酮的組成、存在形式主要包括染料術(shù)素(gnistein)＞大豆黃素(daidzeln)和黃豆黃素(glyeitein),天然情況卜?它們主要以7-0一葡萄糖貳形式存在。本文對大豆捉取物屮異黃酮含量的高效液相色譜測定方法進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，并對樣品的前處理?xiàng)l件進(jìn)行探討。為產(chǎn)品的進(jìn)一步開展研究打下了良好的基礎(chǔ)。1?試驗(yàn)材料與方法1.1儀器高效液相色譜儀,25此微量注射器,50型微孔濾膜，超聲波清洗器1.2試劑與材料對照品大豆黃素、染料木素、黃豆黃素由本實(shí)驗(yàn)室分離制備。卬醇：色譜純試劑。水：白制
4、，二次重蒸；具余試劑均為分析純。標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱取對照品大豆黃素、染料木素、黃豆黃素各lOmg,加入lOOrid容量瓶中，以甲醇溶解，定容至刻度,作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。人豆提取物：木實(shí)驗(yàn)室研究提取。1.3色譜條件色譜柱：Nova—PakCi83.9X150mm4Min(Waters公司)流動(dòng)相：分析試元用流動(dòng)相MeOH：0.4%H3PO4:55：45(v/v)；流速0?7m1/min分析貳元用流動(dòng)相MeOH：0.4%P04=30:70(v/v)；流速0.7ml/min柱溫：25°C檢測波長:260nm1.4分析方法1?4?1標(biāo)
5、準(zhǔn)曲線繪制精密吸収一定體枳的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣分析，測定各組分的峰而積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。1.4.2樣品處理準(zhǔn)確稱取大豆提取物樣品20mg,加1.0mol/L鹽酸甲醇溶液加40m1,于80°C水浴屮I叫流水解0.5h，冷卻并定容至100m1,搖勻后供液相色譜分析。測定水解后組分的峰血積,計(jì)算大豆界黃酮的含量(染料木素、大豆黃素、黃豆黃素與其相應(yīng)試的換算因子分別為：1.60。1.64?1?54)。2?結(jié)果與討論■I大豆?2?1色譜條件選擇以人豆提取物屮主要成分的水解產(chǎn)物染料木素、人豆黃素和黃豆黃素和互間
6、基木分離為指標(biāo)，確定色譜分離條件。從圖1,2可見，實(shí)驗(yàn)中采用Nova—PakS3?9X150nm4pm色譜柱，以MeOH：0.4%HfO尸55：45(v/v)作為流動(dòng)相分析狀元，流速采用0.7rot/rain,大豆黃素與黃豆黃素問分離度達(dá)1.18,染料木素為獨(dú)立峰，以MeOH：0.4%H3PO4：37:70(v/v)作為流動(dòng)相分析試，大豆黃索貳與黃豆黃索貳間分離度達(dá)1.32,染料木素試為獨(dú)立峰，兩種流動(dòng)相的選擇均比較合適。0?4%H3P04的加入可有效改善色譜峰的分離。2.2線性關(guān)系分析準(zhǔn)確移収標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.5、1.0、
7、2.0、4.0、8.0m1并分別定容至10ml；準(zhǔn)確吸取10乩溶液進(jìn)樣，以峰而積(y)與組分濃度(x)進(jìn)行線性回歸分析，得到回歸方程依次為：人豆黃素y=582450x-198,r=0?9998；黃豆黃素y二805610x-298,r：0?9998；染料木素y=979340x-107,r：0.9996。線性范圍分別為2?60—83?2AL/ml、2?088一66.8ML/ml、2?388—76?4吐/ml.2?3樣品預(yù)處理?xiàng)l件探討大豆提取物屮主耍成分以7-0一葡萄精貳形式存在，但由于試的對照品不易提純獲得，而試元對照物制備
8、及提純相對容易，因而在測定過程中可以用試元作為對■照胡，樣站可經(jīng)水解后分析，再經(jīng)換算為大豆異黃酮的含量。染料木素、大豆黃素、黃豆黃素與其相應(yīng)貳的換算因子分別為：1.60,1.64,1.54。對影響樣品水解條件的主要因素(酸濃度、水解時(shí)間、水解溫度等)進(jìn)行三因素3水平止交試驗(yàn)，確立樣品分析時(shí)的最佳處理?xiàng)l件，以總杲黃酮含
