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《吡格列酮通過蛋白對大鼠缺血再灌注損傷心肌保護機制的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、毗格列酮通過p—CREB蛋白對大鼠缺血再灌注損傷心肌保護機制的研究摘要：目的通過檢測大鼠心肌缺血再灌注p-CREB蛋白表達的變化，探討毗格列酮對大鼠缺血再灌注損傷心肌保護機制。方法將55只SD大鼠隨機分為假手術(shù)組、缺血再灌注組、毗格列酮組、毗格列酮+GW9662組，左前降支結(jié)扎的方法建立缺血再灌注損傷模型，伊文思藍染色測定心肌梗死面積，Westernblot法測定心肌組織p-CREB蛋白表達。結(jié)果毗格列酮組梗死面積與缺血再灌注組比較明顯減少(P0.05)；與毗格列酮組相比，毗格列酮+GW9662組p-CREB蛋白表達減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論毗格列酮可能上調(diào)p-CR
2、EB蛋白表達進而抑制缺血再灌注誘導(dǎo)的心肌細胞損傷，GW9662可逆轉(zhuǎn)毗格列酮對心肌細胞的保護作用。關(guān)鍵詞：缺血■再灌注損傷；卩比格列酮；p-CREB蛋白中圖分類號：R542.2R256.2文獻標識碼：A隨著臨床上對于急性冠脈綜合征的溶栓、介入、冠狀動脈搭橋等治療的廣泛應(yīng)用，使冠心病的治療進入再灌注時期，冠狀動脈再通后都將直接面臨心肌缺血再灌注損傷(MIRI)等重大的臨床問題。研究發(fā)現(xiàn)細胞凋亡在細胞再灌注損傷中發(fā)揮重要作用，抗凋亡機制可能是減輕再灌注損傷的新方法。既往發(fā)現(xiàn)卩塞呼烷二酮類藥物對缺血再灌注損傷有保護作用，主要是減輕心肌細胞凋亡口，2]oCREB是環(huán)腺昔酸（cyclicade
3、nosinemonophosphate,cAMP）應(yīng)答元件結(jié)合蛋白的簡稱，對細胞的增殖、再生起重要的作用。最初發(fā)現(xiàn)CREB與學(xué)習及記憶功能有密切關(guān)系，近年研究顯示P-CREB對循環(huán)系統(tǒng)也發(fā)揮重要作用[3]o但關(guān)于毗格列酮在缺血再灌注時p-CREB蛋白表達的影響報道較少。本實驗在原有研究基礎(chǔ)上，觀察過氧化物酶體增殖物激活受體-r（peroxisomeproliferators-activatedreceptor-r,PPARr）激活劑毗格列酮對大鼠缺血再灌注（I/R）心肌p-CREB蛋白表達的影響，以進一步探討毗格列酮抗缺血再灌注損傷的分子機制。1材料與方法1.1主要藥品和試劑鹽酸毗格
4、列酮片由日本武田藥品工業(yè)株式會社生產(chǎn)；GW9662由Pfizer輝瑞公司生產(chǎn)；伊文思藍由江萊生物公司生產(chǎn)；環(huán)磷酸腺昔（cAMP）反應(yīng)元件結(jié)合蛋白一抗由CellSignal公司生產(chǎn)。1.2實驗動物及分組健康雄性SD大鼠55只，體重250g?300g,山西醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供。實驗動物隨機分成4組。假手術(shù)組（10只）：生理鹽水2mL/d灌胃；缺血再灌注組（15只）：生理鹽水2mL/d灌胃；毗格列酮組（15只）：毗格列S?mg/（kg?d）灌胃；卩比格列酮1氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR）特異性阻斷釧V9662組（毗格列酮GW9662組,15只）:毗格列酮Img/（kg?d）灌胃，
5、缺血再灌注前30min靜脈注射GW9662o各組灌胃2周后制作大鼠在體心肌I/R模型。假手術(shù)組只開胸穿線，不結(jié)扎冠狀動脈。1.3方法1.3.1模型建立［4］腹腔注射40%水合氯醛麻醉大鼠（3mL/kg）,心電圖監(jiān)測。切開氣管進行插管，tt1：2,通氣頻喲次/min。暴露心臟后在冠狀動脈榔1mm?2mm處用晞0線的眼科針穿過肺動脈竇和左心建間墊一塑料管后用止血鉗夾緊，觀察左室前壁心肌極及心電圖動態(tài)演變。心肌組織題變瞌心電圖ST段抬高或下降,判斷為結(jié)扎成功缺血30min后放松結(jié)扎部位，使冠狀動脈再通120mine再灌完成后剪下心臟，液氮冷凍心室前壁留取的組織，檢測心肌梗死面積及提取蛋白質(zhì)
6、假手術(shù)組只穿線但不結(jié)扎冠狀動脈，暴露心臟150mino1.3.2心肌梗死面積測俺
7、除假手術(shù)組外每組各取大鼠5只，再灌注完成后重新結(jié)扎先前部位，用2%的伊文思藍2mL經(jīng)腹腔靜脈注入，使心臟染色以區(qū)分非缺血區(qū)（藍染區(qū)）和缺血區(qū)（非藍染區(qū)），迅速取下心臟，剪去心房和右室后無菌紗布吸干表面水分，放入-209冷藏，沿長軸成1mm?2mm的薄片5張，將切片浸入1%TTC的磷酸緩沖液中（pH值7.4）379孵育30min,再用10%的甲醛固定24h以增強染色顏色對比，照相。心肌組織分為妙正常心肌，淺紅色為缺血未梗死心肌，灰白色為梗死心肌。通過計算機圖像分析軟件計算梗死心肌占左寵齡匕(IR/LV)。
8、1.3.3Westernblot法測定p-CREB蛋白表達提取心肌組織勻漿液，用BCA法檢測蛋白定量，進行蛋白制樣，mSDS-PAGE凝膠，然后提取上樣量40g/lane,采用BI0-RAD電泳統(tǒng)80V45min濃縮100V80min進行電泳分離轉(zhuǎn)膜200mA2h、5%脫脂奶粉封閉，加入cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白一抗，稀釋濃度為1：10000,加入二抗進行蠶2h,化學(xué)發(fā)光顯色，按相對比值進行相對定量，即各蛋白目的條帶光密度相對強度二各蛋白目的條帶灰度值/假手
