雞馬立克氏病診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)

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1、雞馬立克氏病診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T18643—2002DiagnotictechniqucsforMarek'sdisease1范圍木標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了雞馬立克氏?。∕D）的診斷技術(shù)。木標(biāo)準(zhǔn)適用于MD的流行學(xué)病普查、產(chǎn)地和口岸檢疫、SPF雞祥的疫病監(jiān)測(cè)。2MD瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)雞馬立克氏病瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)既可以用于馬立克氏病病毒抗原的檢出，也可以用于馬立克氏病病毒抗體的檢出。該方法一般在馬立克氏病病毒感染14d?24d后檢出病毒抗原；抗體的檢出一般在病毒感染3周后。2.1材料準(zhǔn)備2.1.1抗原和標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血淸。2.1.2溶液配制：a）pH7.40.01mol/L磷酸鹽緩沖

2、液;b）l%硫柳汞溶液；c）生理鹽水。以上各種溶液配制方法見(jiàn)附錄A（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）o2.1.3瓊脂板的制備：見(jiàn)附錄B（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）。2.2操作方法2.2.1馬立克氏病病毒抗原檢測(cè)2.2.1.1打孔2.2.1.1.1在己制備的瓊脂板（見(jiàn)附錄B）上，用直徑4mm或3mm直徑的打孔器按六角形圖案打孔，或用梅花形打孔器打孔。中心孔與外周孔距離為3mmo2.2.1.1.2將孔中的瓊脂用8號(hào)針頭斜而向上從右側(cè)邊緣插入，輕輕向左側(cè)方向挑出,勿損壞孔的邊緣，避免瓊脂層脫離子皿底部。2.2.1.2封底用酒精燈火焰輕烤平皿底部至瓊脂輕微溶化為止，封閉孔的底部，以防樣品溶液側(cè)漏。2.2.1.3加樣用微量

3、移液器吸取用滅菌牛理鹽水稀釋的標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清（按產(chǎn)品使用說(shuō)明帖的要求稀釋）滴人中央孔，標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性抗原懸液分別加入外周的第1、第4孑L中，在外周的第2、3、5、6孔處（不打孔）按順序分別插入被檢雞的羽毛髓質(zhì)端（長(zhǎng)度約0.5cm）；或在第2、3、5、6孔中加入被檢的羽髓浸出液，每孔均以加滿不溢出為度，每加一個(gè)樣品應(yīng)換一個(gè)吸頭。2.2.1.4感作加樣完畢后,靜止5rain-lOrain,將平皿輕輕倒置,放人濕盒內(nèi),置37°C溫箱中反應(yīng)，分別在24h和48h觀察結(jié)果。2.2.2馬立克氏病抗休檢測(cè)操作方法同2.2.1,加樣如下：用微量移液器吸取用滅菌生理鹽水（見(jiàn)附錄A中A3）稀釋的標(biāo)準(zhǔn)抗原液（

4、按產(chǎn)品使用說(shuō)明書(shū)的耍求稀釋）滴人中央孔,標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血淸分別加入外周的第1、第4孔中，待檢血清按順序分別加入外周的第2、3、5、6孔中。每孔均以加滿不溢出為度，每加一個(gè)樣品應(yīng)換一個(gè)吸頭。2.3結(jié)果判定及判定標(biāo)準(zhǔn)MD瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)結(jié)果判定如圖1所示2.3.1將瓊脂板置日光燈或側(cè)強(qiáng)光下進(jìn)行觀察，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血淸與標(biāo)準(zhǔn)抗原孔間有明顯沉淀線，而待檢血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原孔間或待檢抗原與標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清孔Z間冇明顯沉淀線，片.此沉淀線與標(biāo)準(zhǔn)抗原和標(biāo)準(zhǔn)血清孔間的沉淀線末端相融合，則待檢樣品為陽(yáng)性。2.3.2當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原孔的沉淀線的末端在比鄰的待檢血清孔或侍檢抗原孔處的末端向中央孔方向彎曲時(shí)，待檢樣品

5、為弱陽(yáng)性。2.3.3當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原孔間冇明顯沉淀線，而待檢血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原孔或待檢抗原與標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清孔之間無(wú)沉淀線，或標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清與抗原孔間的沉淀線末端向毗鄰的待檢血清孔或待檢抗原孔直仲或向外側(cè)偏彎曲時(shí)，該待檢血清為陰性。2.3.4介于陰、陽(yáng)性Z間為可疑?？梢蓱?yīng)垂檢，仍為可疑判為陽(yáng)性。3的臨床診斷與判定標(biāo)準(zhǔn)3.1MD的特征性臨床癥狀在雞群中，病雞臨床癥狀表現(xiàn)為癱瘓，并且兩腿前后伸展呈“劈叉”姿勢(shì)時(shí)，一般可以作為MD的示病癥狀，可初步判定為2.2MD的特征性病理變化2.2.1MD的神經(jīng)特征性病理變化神經(jīng)型MD的病理變化為外周神經(jīng)腫脹，呈半透明水腫樣，色澤變淡，橫紋消失，其腫

6、脹程度一般為正常神經(jīng)的2?3倍。這些變化多發(fā)生在腰薦神經(jīng)從、坐骨神經(jīng)從、臂神經(jīng)從、頸部迷走神經(jīng)叢等部位。rh于多為不對(duì)稱性，通過(guò)比較對(duì)側(cè)神經(jīng)將有助于判定。2.2.2MD的皮膚特征性病理變化皮膚型MD病理變化比較少見(jiàn)。其病理變化特征為：以皮膚的羽毛囊為中心，形成半球形隆起的腫瘤，其表面冇時(shí)可見(jiàn)鱗片狀棕色痂皮。2.2.3MD的眼睛特征性病理變化眼型MD是由于淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)虹膜而導(dǎo)致的病理變化，虹膜呈環(huán)狀或斑點(diǎn)狀褪色，出現(xiàn)淡灰色；瞳孔不規(guī)則，有時(shí)偏向虹膜一?側(cè)。2.3MD的病理組織學(xué)變化采集病雞腫脹的外周神經(jīng)和內(nèi)臟的腫瘤組織樣品，按常規(guī)方法制備石蠟切片、蘇木素伊紅(IIE)染色。通過(guò)普通

7、光學(xué)顯微鏡進(jìn)行病理組織學(xué)觀察判定。根據(jù)病變組織中浸潤(rùn)細(xì)胞的種類及形態(tài)學(xué)，外周神經(jīng)病理組織學(xué)變化可分為A、B、C三個(gè)型。在同一只雞的不同神經(jīng)町能會(huì)出現(xiàn)不同的病變型。A型病變以淋巴母細(xì)胞，大、中、小淋巴細(xì)胞及冃噬細(xì)胞的增生浸潤(rùn)為主。B型病變表現(xiàn)神經(jīng)水腫，神經(jīng)纖維被水腫液分離，水腫液中以小淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞和許旺氏細(xì)胞增生為主。C型病變?yōu)檩p微的水腫和輕度小淋巴細(xì)胞增生。內(nèi)臟和其他組織的腫瘤與A型神經(jīng)病變相似。通常為大小各異的淋巴細(xì)胞增生為主。2.4鑒別診斷禽白血病(LL)和網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病