茚三酮鑒定氨基酸概述

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1、茹三酮鑒定氨基酸概述仁苗三酮簡(jiǎn)介前三酮（Ninhydrine），又稱水合前三酮，水合前滿三酮,為白色或淺黃色結(jié)晶性粉末。苗三酮是一種用于檢測(cè)氨或者一級(jí)胺和二級(jí)胺的試劑。當(dāng)與這些游離胺反應(yīng)時(shí)，能夠產(chǎn)生深藍(lán)色或者紫色的物質(zhì)，叫做OHOHRuhemann紫。苗三酮常用來檢測(cè)指紋,這是由于指紋表面所蛻落的蛋白質(zhì)和肽中含有的賴氨酸殘基，其上的一級(jí)胺被前三酮檢測(cè)。在室溫條件下，它是一種白色的固體物質(zhì)，溶于乙醇和丙酮。前三酮可以看作是是二氫苗-1,2,3-三酮的水合物。1901年，苗三酮被成功研制出來以后主耍用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，1954年，瑞典科學(xué)家Oden和Hofsten

2、將其應(yīng)用于潛在汗液手印的顯現(xiàn)。前三酮與汗液中的氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)等發(fā)生反應(yīng)，生成藍(lán)紫色的手印紋線。苗三酮也可以用于蛋白質(zhì)的氨基酸分析。除去脯氨酸之外的大多數(shù)氨基酸,水解之后可與苗三酮反應(yīng)。水解中某些氨基酸的側(cè)鏈也會(huì)被降解。因此對(duì)于那些與苗三酮不反應(yīng)或者發(fā)牛其他反應(yīng)的氨基酸需要另作分析。其余的氨基酸經(jīng)過色譜分離后可以比色定量。在分析化學(xué)反應(yīng)的薄層色譜（TLC）中，它可以用于檢測(cè)所有的胺類，氨基甲酸酯類，在經(jīng)過充分熱處理后可以檢測(cè)酰胺類物質(zhì)。2.實(shí)際運(yùn)用2.1指紋鑒別汗液手印屮的汗液成分絕大多數(shù)是水（約99%以上），其余是少量的無機(jī)物和有機(jī)物，有機(jī)物中包括了人

3、體所含有的各種氨基酸。苗三酮與手印汗液中的氨基酸發(fā)生顯色反應(yīng)而現(xiàn)岀手卬。當(dāng)苗三酮與氨基酸反應(yīng)時(shí)可以釋放C02o二氧化碳中的碳原了來源于氨基酸的竣基碳。在考古研究中，這個(gè)反應(yīng)用于釋放古老骨骼中竣基碳用于穩(wěn)定同位素分析，以幫助重現(xiàn)古代生物的食物結(jié)構(gòu)。用一種標(biāo)記底物處理的土壤，隨后利用苗三酮與氨基酸的反應(yīng)釋放竣基胺，可以證明這種底物是否被吸收進(jìn)微生物蛋白質(zhì)。這種方法成功的發(fā)現(xiàn)了一些氨氧化細(xì)菌（也叫做硝化細(xì)菌）利用土壤中的尿素作為碳源。法醫(yī)常用前三酮溶液分析諸如紙張等多孔表面上的潛指紋。手指所分泌的細(xì)微汗液聚集于獨(dú)特的手指紋路表面，也即含有氨基酸的指紋，經(jīng)過苗三酮處

4、理可以將氨基酸指尖紋路變?yōu)榭梢姷淖仙?.2測(cè)定茶葉中游離氨基酸總量茶葉中游離氨基酸含量是用來描述茶葉鮮爽程度的一個(gè)重要品質(zhì)指標(biāo)，還是人體所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，同吋又對(duì)人體疾病的康復(fù)和預(yù)防起著極重要的保健作用。測(cè)定茶葉中的游離氨基酸的含量對(duì)茶葉的開發(fā)利用具有一定指導(dǎo)意義。以茶氨酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用分光光度計(jì)為測(cè)定儀器，探索一種適丁-茶葉游離氨基酸含量的分析方法。采用比色法測(cè)定茶葉中游離氨基酸總量，測(cè)定原理為:氨基酸與水合苗三酮共同加熱被氧化分解產(chǎn)生co?、氨和比氨基酸少一個(gè)碳原子的醛,此時(shí)前三酮被還原。在弱酸性溶液中，還原卸三酮與氨及另一分子卸三酮縮合成藍(lán)紫色化合物

5、苗二酮胺⑴YDA)DYDA在570nm處有最大吸收。采用苗三酮比色法測(cè)定茶湯中的游離氨基酸總量，采用沸水萃取，最佳的試驗(yàn)條件為:pH8.0，沸水浴加熱15min,冷卻lOmin后在最大吸收波長(zhǎng)570nni處測(cè)定。方法的變異系數(shù)小于1.69%,加標(biāo)平均冋收率為96.33%。本法具有操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性重現(xiàn)性較好等優(yōu)點(diǎn)。2.3定性定量檢測(cè)絲氨酸隨著人們對(duì)絲氨酸牛理作用的深入認(rèn)識(shí)和醫(yī)藥保健事業(yè)的不斷發(fā)展，醫(yī)藥、食品、飼料等行業(yè)對(duì)絲氨酸的需求量正迅速擴(kuò)人.雖然L—絲氨酸屬于非必需氨基酸，但它卻具有許多重要的生理功能及用途，在醫(yī)藥、食品、化妝品中均有較為廣泛的應(yīng)用.因此，

6、測(cè)定混合氨基酸中絲氨酸的含量對(duì)絲氨酸的開發(fā)利用具有重要意義.a—氨基酸與苗三酮在弱酸性溶液中共熱，反應(yīng)后經(jīng)失水脫竣生成氨基苗三酮，再與水合苗三酮反應(yīng)牛成紫紅色或藍(lán)色物質(zhì)，如圖1.脯氨酸等仲胺氨基酸與前三酮反應(yīng)生成黃色物質(zhì).絲氨酸和苗三酮在弱酸性條件下共熱可以生成紫紅色的縮合物質(zhì)，且其顏色隨著絲氨酸的含量變化而有所不同.十RCH()-

7、-C(b圖1a—氨基酸與苗三酮的顯色反應(yīng)上述反應(yīng)生成的紫紅色縮合物顏色的深淺還與反應(yīng)的PII、顯色劑的用量、反應(yīng)的溫度及時(shí)間有關(guān)。首先，將苗三酮加入到展層劑中，再對(duì)氨基酸混合液進(jìn)行層析.在一定條件下將層析后的前三酮與氨基酸進(jìn)行顯

8、色反應(yīng)，根據(jù)不同顏色即可鑒別絲氨酸.然后，對(duì)不同劑量的絲氨酸標(biāo)準(zhǔn)液使用上述方法繪制絲氨酸標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度一含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，用以計(jì)算氨基酸水解液絲氨酸的含量.結(jié)果表明：諱三酮法定性定量檢測(cè)絲氨酸的最佳實(shí)驗(yàn)條件為溶液pII在4.5左右，顯色劑用量為每1OmL展層劑中加入2.5mL0.1%前三酮，并在105€下加熱5min.3?總結(jié)氨基酸的鑒定對(duì)于人們?nèi)粘Ｅ．a(chǎn)牛活十分重要。苗三酮鑒定氨基酸，反應(yīng)靈敏，是鑒定氨基酸的最簡(jiǎn)便方法。其顯色快，現(xiàn)象明顯，已經(jīng)廣泛運(yùn)用于刑偵、農(nóng)林、化學(xué)、金屈等各個(gè)行業(yè)。4.參考文獻(xiàn)[1]張振華.a—氨基酸與苗三酮顯色反應(yīng)影響因素的探討[J]?

9、邵陽高等?？茖W(xué)校學(xué)報(bào)，2000,13(1)：42-4