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《多糖結(jié)構(gòu)方面》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、多糖的提取、分離純化真菌多糖是從金菌細胞壁和組織體的菌絲之中分離出的由十個以上的單糖以糖昔鍵連接而成的高分子多聚物。真菌多糖能通過對淋巴細胞、巨噬細胞、網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)而調(diào)節(jié)機體的免疫功能，在治療腫瘤、心血管、肝炎、糖尿病，其至愛滋病等方面顯示出特殊的效果，有些已在臨床上廣泛應用⑴。真菌多糖作為藥物毒性極小，其在治療代謝紊亂、感染及癌癥等疾病方面的應用正不斷增加，它在醫(yī)療上是一種很好的佐料。真菌多糖其研究日益受到人們重視。1真菌多糖的提取、分離純化與純度檢測真菌多糖的提取和分離提取真菌多糖的原料，應先用丙酮、乙醯或乙醇進行預處理，以除去原料屮的脂類物質(zhì),然后用熱水、稀酸或稀堿
2、反復提取，提取液中和至中性后，用甲醇或乙醇沉淀，沉淀物經(jīng)離心、干燥后，制得粗多糖。JJJ粗多糖中蛋白的去除常用的脫蛋白的方法主要有3種：Sevag法是用氯仿、正丁醇或正戊醇按5:1混合后，加到樣品水溶液屮振搖，離心除去凝膠狀蛋口質(zhì)，反復多次直至蛋口質(zhì)除盡為止。三氟三氯乙烷法⑵是多糖溶液和三氟三氯乙烷1:1混合,在低溫下攪拌lOmin左右，離心得上層溶液，上層溶液繼續(xù)用上述方法處理兒次，即得無蛋白的多糖溶液。三氯乙酸法是在多糖水溶液中滴加3%的三氯乙酸，宜至溶液不再渾濁為止，于5?1O°C放置過夜，離心除去沉淀即得無蛋片的的多糖溶液，但是此法會引起多糖的降解，不宜采用。另外
3、還有硫酸錢法和蛋口酶法。1.1.2脫色多糖中所含的色素一般有兩種，即游離色素和結(jié)合色素。游離色素大多呈陰離子狀態(tài)，可以通過離子交換法除去，常用DEAE纖維素或DEAE-Sepharose?FastFlow來吸附色素。若多糖與色素結(jié)合，則色素易被離子交換柱吸附，不易被水洗脫，這類色素可采用氧化脫色：以濃氨水(或NaOH溶液)調(diào)至ph&O左右,于50°C以下滴加H2O2至淺黃色，保溫2h；根據(jù)真菌多糖與色素的結(jié)合情況選擇合適的脫色方法⑶。1.1.3除低聚糖等小分子雜質(zhì)通過逆向水流透析、選擇不同的濾膜進行超濾或超速離心可以除去多糖中的低聚糖等小分子雜質(zhì)。1.2真菌多糖的提純與純
4、度檢測1.2.1提純分級沉淀法常采用甲醇、乙醇和丙酮等沉淀劑；柱層析⑷和纖維柱層析：常用不同濃度乙醇水溶液由高到底進行洗脫，將各種多糖分離開來；纖維素陰離子交換柱層析法，常用的交換劑為DEAE-纖維素和ECTEOLA-纖維素，適用于分離各種酸性、中性多糖和粘多糖；凝膠柱層析法常用的凝膠有葡聚糖凝膠(Sephadex)>瓊脂糖凝膠(Sepharose)、DEAE-Sephadex和DEAE-Sepharose1MFastFlow,此法不適宜粘多糖的分離。1.2.2純度檢測多糖的“純嚀旨的是一定分子量范圍的均一組分，純度只代表著相似鏈長的平均配布。常用的多糖純度的檢測方法較多
5、超離心法的原理是根據(jù)在密度梯度超離心場中，密度大小和相同顆粒移動相同，60,OOOipm離心，如樣點在蔗糖梯度中呈單一峰，則認為是單一組分；紙層析法的結(jié)果呈現(xiàn)一集中斑點可認為是均一組分；高壓電泳法是依據(jù)多糖分子在電場中的移動速度取決于其所帶電荷的多少與分子的形狀、大小，均一組分多糖電泳后染色呈單一色斑或單一峰；凝膠柱層析是若部分收集中出現(xiàn)單一對稱峰則為單一組分；旋光測定法是依據(jù)化學組成相同，結(jié)構(gòu)相同的多糖具有相同的旋光性；采用高壓液相法吋，凡在對多糖檢測屮形成對稱的單一峰被視為組分單一。1.2.3分子量測定從真菌中提取、純化的多糖是一類分子量近似的高聚物分子的混合物，因此
6、多糖的分子量是一個平均值。常用的分子量測定方法有滲透壓法：利用膜滲透壓計（M0儀）可以測定分子量范圍在1?50萬之間的多糖分子量；蒸汽壓法：利用蒸汽壓滲透計（VPO儀）可以測定分子量范圍在500?10000Z間的多糖分子量；端基法：通過測定單位重量樣品中所含可測端基數(shù)，計算檢樣的分子量；光散射法：利用光散射分子量測定儀測定分子量；粘度法：先測定樣品特性粘度耳,然后通過換算方程，即經(jīng)驗式n=KMa,計算出分子量⑸，方積年⑹認為高效液相色譜法是真菌多糖最好的分子量測定法:用不同標準分子量的葡聚糖Detxran-T系列（分子量4000至200萬的十個標準品）作對照，用高效液相色
7、譜法測定，由lgMw對Rt作圖獲得標準曲線，然后在相同條件下獲得樣品層析圖譜，由GPC（計算機軟件）計算得分子量⑺。多糖的結(jié)構(gòu)解析多糖的結(jié)構(gòu)分析真菌多糖的結(jié)構(gòu)分析方法一般來說可以分為兩大類：一類是傳統(tǒng)的化學方法，一類是波譜學方法。下面簡要介紹化學方法和波譜學方法在真菌多糖的結(jié)構(gòu)分析方面的作用。2.1化學方法此法是用來對一些簡單的單糖、二糖和簡單的寡糖進行分析的經(jīng)典方法。它是通過完全酸水解、部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化分析和氣質(zhì)聯(lián)用對多糖進行解析的。2丄1水解法其通過完全水解將多糖鏈分解成單糖，此是分析多糖鏈組
