幽門螺桿菌flaB基因克隆及序列分析

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1、【論著】幽門螺桿菌flaB基因克隆及序列分析夏曉燕1,段廣才2、'，代麗萍J范清堂'［摘要1目的：將幽門螺桿菌(Helicobacter、哄H,Hp)糧毛蛋白B亞單位基因(/ZoB)克隆到質(zhì)粒載體PNEB193上，并進(jìn)行序列分析，為Hp疫苗的構(gòu)建奠定基礎(chǔ)。方法：用PCR方法擴(kuò)增Hp/ZaB基因，并將其定向克隆入質(zhì)粒pNEB193±,然后進(jìn)行序列分析。結(jié)果：PCR擴(kuò)增獲得長度為1545bp的腫基因片段，并成功克隆入pNEB193,序列分析結(jié)果顯示擴(kuò)增的JTaB基因序列與Genebank公布的JlaB基因序列基本一致。結(jié)論：本研究獲得了flaB陽性克隆子，為Hp重組疫苗的

2、研究莫定了基礎(chǔ)。［關(guān)鍵詞］幽門螺桿菌；flaB;基因克?。粶y序［中圖分類號］R183［文獻(xiàn)標(biāo)識碼］A［文章編號］1003-8507(2005)12-1592-03CLONEANDSEQUENCEANAI.YSISOFHELICOBACTERPYIjORIFLAGELLARPROTEINBGENE.XIAXiao-yan,DU-ANGuan-cai,FANQing-tang,etal.DepartmentofPublicHealthfHenanUniversityofSlierixafidTechnology,Luoyangf471009Abstract；Objecti

3、ve：TocloneHelicobacterpylori(H.pylori)flaRintoplasmidandanalyzegenesequence,andtolayfoundationforHpvaccine.Methods：H.pyloriflaBgenewasamplifiedbyPCRandwasinsertedintoplasmidpNEB193directionally.ThesequenceofflaBwasanalyzed.Results：A1545basepairslongflaBgenewasobtainedusingPCRmethodandw

4、asclonedintoplasmidpNEB193successfully.ThesequenceanalysisforflaBshowedthattheflaBgenewasidenticalwithGenebank's.Conclusion:ItisindicatedthatwehaveobtainedthecorrectflaBgenewhichwilllayfoundationforH?pylorirecombinantvaccine?Keywords：Helicobacterpylori;flaB;geneclone;sequence幽門螺桿菌（Hdic

5、obacterpylori.簡稱Hp）感染在世界范圍內(nèi)廣泛流行。已證實(shí)Hp感染是慢性胃炎和消化性潰瘍的重要病因，與胃癌和胃MALT淋巴瘤的發(fā)病也有密切關(guān)系⑴2】。目前，主要應(yīng)用抗生素和質(zhì)子泵抑制劑來治療Hp,但廣泛應(yīng)用抗生素會導(dǎo)致耐藥菌的不斷增多⑶，復(fù)發(fā)的機(jī)會也較大。因此，根除Hp感染只有依靠疫苗的成功研制。鞭毛蛋白（FlaB）是Hp的蛋白質(zhì)和免疫原之一，具有免疫原性且位于細(xì)菌表面，相對保守，有望成為Hp亞單位疫苗的重要候選組分之一⑷。本研究對Hp/ZoB基因進(jìn)行了成功克隆。1材料與方法1.1質(zhì)粒與菌株質(zhì)粒PNEB193購自NEB公司。Hp菌株MEL-Hp27系本實(shí)驗(yàn)

6、室分離培養(yǎng)。大腸桿菌TB1系本研究室保存。1.2試劑試劑Sall、PsiI、PyrobestDNA聚合蘭、［資助項(xiàng)目］本課題系河南竹醫(yī)學(xué)科技創(chuàng)新人才工程基金資助項(xiàng)目2000-84［作者單位］1?河南科技大學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)教研室，祜陽，471003;2.鄭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病學(xué)教研室；3?河南省分子醫(yī)學(xué)亜點(diǎn)學(xué)科開放實(shí)臉室（作者簡介］夏曉燕（1975~）,女，講師，主買工作方向：分子詭行病學(xué)。（通訊作者］段廣才，E-mail：gcduan?public2.zz.ha.cnTqDNA連接爾購自大連寶信生物工程公司，DNA標(biāo)準(zhǔn)分子質(zhì)量XDNA/E8RI+HindDImarke

7、r購自上海生工公司。其他常規(guī)試劑按《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》要求配制。1.3Hp培養(yǎng)與Hp基因組DNA的制備1.3.1Hp培養(yǎng)Hp用含8%羊血的布氏瓊脂培養(yǎng)基,3兀厭氧環(huán)境培養(yǎng)。1.3.2Hp基因組DNA的制備DNA用常規(guī)酚、氯仿抽提法獲得。1.4引物合成根據(jù)NCTC11637flaB序列設(shè)計引物。在上游引物，引物由上海生工公司合成。5'端加PstI酶切位點(diǎn)，保留起始密碼子ATG;在下游引物5'端加EooRlK切位點(diǎn)，保留終止密碼子TAA。引物序列如下：UpperGGGCTGCAGATGAGTTTTAGGATAAA（26bp）PstIlower（XGAAT