雞白痢免疫血清制備ppt課件

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1、雞白痢免疫血清制備組員：凌豪李昀哲張萬石佑銘尤智強ppt制作：凌豪實驗?zāi)康暮鸵罅私庥绊憴C體免疫應(yīng)答強度的因素;明確初次應(yīng)答和再次應(yīng)答抗體產(chǎn)生的規(guī)律；制備雞白痢的抗血清；熟悉佐劑的制備和動物免疫的常用方法；了解抗體檢測的常用方法。在免疫學(xué)實驗中,為制備抗體通常以抗原性物質(zhì)給動物注射,經(jīng)一定時間后,動物血清中可產(chǎn)生大量特異性抗體，這種含有特異性抗體的血清稱免疫血清。實驗原理免疫應(yīng)答的影響因素抗體的產(chǎn)生通常與抗原的質(zhì)和量、動物種類以及接種的途徑有密切關(guān)系。一、抗原分子的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)1.分子量：分子量越大，免疫原性越強。2.化學(xué)組成及結(jié)構(gòu)（1）蛋白質(zhì)（2）多糖：具有免疫原性,較蛋白質(zhì)弱。（3）核酸

2、：多無免疫原性。3.結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性4.分子構(gòu)象5.易接近性6.物理狀態(tài)二、宿主方面的因素1.遺傳因素同種動物不同品系及不同個體對同種抗原產(chǎn)生不同強度的免疫應(yīng)答。2.其他因素年齡、性別與健康狀態(tài)。三、免疫原的劑量及進入途徑（1）劑量1）劑量不足或過多均不引起免疫應(yīng)答。2）重復(fù)進入引起強免疫應(yīng)答。（2）途徑：皮內(nèi)、皮下、肌肉、靜脈、腹腔、呼吸道和口服免疫應(yīng)答水平依次降低?？贵w產(chǎn)生的一般規(guī)律初次應(yīng)答和再次應(yīng)答規(guī)律?？贵w產(chǎn)生的順序規(guī)律：IgM-IgG-IgA-IgD-IgE初次應(yīng)答和再次應(yīng)答抗體產(chǎn)生比較抗原抗體反應(yīng)抗原與抗體特異性結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物。物質(zhì)基礎(chǔ):1）抗原表位與抗體高變區(qū)間的互補結(jié)

3、合2）抗原表位與抗體高變區(qū)的溝槽分子表面的結(jié)合3）抗原抗體之間的結(jié)合力4）親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體抗原抗體反應(yīng)的一般規(guī)律特異性與交叉反應(yīng)性；可逆性：表面的結(jié)合，有可逆性；抗原抗體交叉反應(yīng)示意圖實驗方案免疫佐劑制備及動物初次免疫（第一周）再次免疫及血清采集（第二周）血清采集及抗體檢測（第三周）W1W2W3未免疫血清采集再次免疫血清采集初次免疫血清采集初次免疫再次免疫實驗材料動物：家兔（每組一只）抗原：雞白痢沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)型C79—1菌株佐劑：完全福氏佐劑。其它：普通瓊脂培養(yǎng)皿、菌液標(biāo)準(zhǔn)比濁管、注射針筒、離心機、離心管、無菌三角燒瓶、恒溫箱、冰箱、毛細(xì)管瓊脂培養(yǎng)液、酒精、0.01%硫柳汞第一次實驗

4、步驟1.免疫原制備用雞白痢沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)型C79-1菌株接種在普通瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)制備菌液，菌液經(jīng)滅活，酒精沉淀處理，制成免疫原，按細(xì)菌標(biāo)準(zhǔn)比濁管確定免疫原的濃度。2.動物免疫血清制備將免疫原液與完全弗氏佐劑等量混和制成免疫抗原每毫升含菌量為10億,于兔背最長肌分兩點注射。每點注射0.5毫升作為基礎(chǔ)免疫,以后每間隔6天耳靜脈注射免疫原液一次,劑量依次為15億30億60億120億150億第一次實驗步驟第二次實驗步驟3.血清提取最后一次免疫7天后試血，效價達(dá)到預(yù)期要求，無菌采血，分離血清，分裝與中性瓶，按血清量1/500cc加入硫柳汞防腐，4攝氏度保存。Thanks!