莪術(shù)油脂質(zhì)體制備工藝的考察

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1、喪術(shù)油脂質(zhì)體制備工藝的考察高效液相色譜儀Watersl525WH-90A微型旋渦混合器KQ-400KBV高功率數(shù)控超聲清洗器HJ-5多功能攪拌器FA2004電子分析天平（分度值O.lmg）1.2材料磷酸二氫鉀氫氧化鈉氯仿甲醇卵磷脂膽固醇乙鷹犍牛兒酮對照品（111665-200902）葡聚糖凝膠G-50莪術(shù)油2方法與結(jié)果2.1空白脂質(zhì)體對分析結(jié)果影響考察美國Waters公司上海振榮科學(xué)儀器有限公司昆山市超聲儀器有限公司常州國華電器有限公司德國賽多利斯國藥集團化學(xué)試劑有限公訶國藥集團化學(xué)試劑有限公司國藥集團化學(xué)試劑有限公司國藥集團化學(xué)試劑有限公司國藥

2、集團化學(xué)試劑有限公司國藥集團化學(xué)試劑有限公司國藥集團化學(xué)試劑有限公司中國藥品生物制品檢定所（純度98.8%）北京拜爾迪生物公司實驗室自制精密量取空門脂質(zhì)體0.5ml于10ml容量瓶屮，加入甲醇定容至刻度。精密量取空白脂質(zhì)體溶液0.1ml于10ml容雖瓶中，加入甲醇定容至刻度。液相色譜條件同2.1.2：檢測波長為216nm,測定結(jié)果見圖3.1。精密稱取協(xié)牛兒酣對照品20mg,加入10ml甲醇溶解，定容至刻度得A標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密堪収握牛兒酮人標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5ml,置于10ml容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，得B標(biāo)準(zhǔn)溶液；再將密量取猶牛兒酮B標(biāo)準(zhǔn)溶液0.8mL

3、,置于10ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為&0憾/邊的C標(biāo)準(zhǔn)溶液。収20plC標(biāo)準(zhǔn)溶液進樣，液相色譜條精密量取空門脂質(zhì)體0.5ml于10ml容量瓶屮，加入甲醇定容至刻度。精密量取空白脂質(zhì)體溶液0.1ml于10ml容雖瓶中，加入甲醇定容至刻度。液相色譜條件同2.1.2：檢測波長為216nm,測定結(jié)果見圖3.1。精密稱取協(xié)牛兒酣對照品20mg,加入10ml甲醇溶解，定容至刻度得A標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密堪収握牛兒酮人標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5ml,置于10ml容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，得B標(biāo)準(zhǔn)溶液；再將密量取猶牛兒酮B標(biāo)準(zhǔn)溶液0.8mL,置于10ml容量

4、瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為&0憾/邊的C標(biāo)準(zhǔn)溶液。収20plC標(biāo)準(zhǔn)溶液進樣，液相色譜條件同2.1.2,檢測波長為216nm,測定結(jié)果見圖3.2。圖3.2犍牛兒舸液相色i?l分析圖譜由圖3」和圖3.2可知，吸收波長在216nm卜?空門脂質(zhì)體不會對擁牛兒酮的檢測產(chǎn)生顯著干擾。2.2磷酸鹽緩沖液(PBS,pH=6.5)的配制旳稱取磷酸二氫鉀0.689,加O.lmol/1的氫氧化鈉溶液15.2ml,用水稀釋至100ml即得。2.3莪術(shù)油脂質(zhì)體分離與包封率和載藥量測定脂質(zhì)體的分離方法冇透析法、凝膠過濾法和離心法【列。本試驗考察了凝膠過濾法來測定

5、藥物包封率。2.3.1凝膠的選擇采用凝膠過濾法分離我術(shù)油脂質(zhì)體和游離藥物測定包封率，國外選擇的凝膠范用較廣，不同交聯(lián)度的簡聚糖凝膠均有應(yīng)用.木實驗采用較常用的SephadexG?50對游離藥物和技術(shù)油脂質(zhì)體進行分離。2.3.2洗脫液的選擇莪術(shù)揮發(fā)油中主耍有效成分是大量的倍半話類藥物，分子中的內(nèi)酯壞是只有抗腫瘤活性的必要結(jié)構(gòu)，其存在具有pH依賴性，當(dāng)pH>7時易開環(huán)形成竣酸形式，因此選擇pH為6.5的PBS緩沖液為洗脫液"401.2.3.3葡聚糖凝膠柱的制備稱取一定屆葡聚糖凝膠SephadexG?50（約2g）,經(jīng)pH6.5的PBS溶脹12h,裝于1

6、.5x25cm的玻璃層析柱中制備凝膠柱，裝柱高度為15cml4,Jo234洗脫曲線繪制用pH6.5的PBS平衡層析柱，粘密量取技術(shù)油脂質(zhì)體lml上柱，用PBS洗脫，流速控制在1.Oml/min左右，用帶有刻度的試管每隔1ml收集一管，總共收集50管，每份均用甲醇稀釋至10ml,在216nm下進樣，根據(jù)蜂面積繪制流出曲線。見圖3.3。圖3.3莪術(shù)油脂質(zhì)體的流出曲線根據(jù)流岀曲線可知，游離的藥物在24ml怎右開始流出，與之前的脂質(zhì)體部分實現(xiàn)了較好的分離，便于進一步準(zhǔn)確測定游離藥物的量。2.3.5柱回收率分別配制高、中、低三種不同濃度的攏牛兒酗標(biāo)準(zhǔn)液，取l

7、ml分別上柱,在上述2.3.4條件卜?洗脫，然后收集游離的藥物組分，進行稀釋，定容，在216nm波長下進行測定，計算犍牛兒酮柱回收率，結(jié)果見表3.1。表3.1凝膠柱冋收率測定結(jié)果(X士s,n=3)加入槌牛兒酮濃度(pg/ml)測得犍牛兒酮濃度(pg/ml)回收率(％)RSD%1.00.988^0.4198.800.414.04.008±0.35100.200.358.07.898土0.5298.720.52山表3.1可知，凝膠柱平均回收率是99.24%,表明葡聚糖凝膠對犍牛兒酮的吸附能力很小，可以認為藥物能被完全洗脫。2.3.6加樣回收率分別配制高

8、、中、低三種不同濃度的犍牛兒酮標(biāo)準(zhǔn)液，向其中分別加入空白脂質(zhì)體,得到混合液，取lml上柱，在上述2.3.4條件下洗脫，然后