武漢東康源高效液相色譜法測定飼料中磺胺喹惡啉方法研究DKY

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1、武漢東康源科技實驗室為您提供木方法提取操作簡便、快捷，通過上述實驗考查。此色譜條件下，分辨率高，干擾少，適用于配侖飼料、濃縮料及添加劑預(yù)混合飼料中磺胺睦惡咻的測定。方法最小檢出濃度滿足實際監(jiān)督檢測需要，具有較好的準(zhǔn)確度及精密度。高效液相色譜法測定飼料屮磺胺嗤惡嘛方法研究廣泛用于養(yǎng)盒業(yè)，磺胺座惡麻加磺胺類抗生素兼有抗球蟲作用。其口服后吸收迅速，但排泄緩慢，殘留在組織器官及雞蛋中時間長，人食用后，對人體發(fā)生耐藥性等副作用。世界衛(wèi)生紐?織(WHO規(guī)定動物紐織、奶的最高殘留限量(MRL值為100ug/kgFl本等國規(guī)定肉雞屮不得檢出。因此，該藥的使用應(yīng)嚴(yán)格控制用藥期及用藥量，以保證產(chǎn)品的

2、平安及對外貿(mào)易疏通?；前粪簮篒林純品為黃色粉末，據(jù)英國獸費典記載。幾乎無味，不溶于水，溶于甲醇、乙醇,易溶于堿性溶液。目前，飼料屮磺胺吟惡咻的檢測方法美國AOAC規(guī)范是采川分光光度法,該法要求含阿散酸及不含阿散酸的飼料采用兩種不同的測定方法。而國內(nèi)飼料目詢添加組分較復(fù)雜，檢測者對飼料情況是未知的難以確定用哪一個方法；H該方法中盂要重氮化試劑做偶侖反應(yīng)，其毒性人，對操作者及環(huán)境都會造成危害。因此，沒有采用該法。另外，還有文獻(xiàn)報道用氣和色譜法測定，中間仍需重氮化衍半。最終選用高效液相色譜法。1?測定方法離心，過濾，HPLC儀上分離,1.1原理用甲醇水溶液提取飼料中的磺胺唾惡麻。紫外檢

3、測器240nm處測定。1.2試劑和溶液除特別注明外均為分析純試劑；水為蒸憎水，以下所用的試劑。色譜用水符合GB僧6682規(guī)定的一級水。121磺胺嗤惡I#標(biāo)準(zhǔn)品：含磺胺嗤惡Rtf(C14H12N4O2S95.0%。1.2.2甲醇：色譜純。1.2.3磷酸鹽溶液：取磷酸二氫鉀3.40g和磷酸氫二鉀5.71g加水溶解并稀釋至lOOOmL置4°C冰箱中避光保存，124堿胺嗤惡嚇標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取堿胺嗤惡1林(4.150噸溶于叩醉并稀釋成0.1mg/mL貯藏液。啟效期1個月。臨用前，取此貯藏液用水稀釋成適當(dāng)濃度的規(guī)范工作液。1.2.5提取液：甲醇l()()mL+水5()mL1.3儀器131實

4、驗室常川儀器設(shè)備1.3.2高效液相色譜儀（配紫外檢測器）1.3.3分析天平：感量為0.000lg和0.00lg1.3.4旋渦振蕩器1.3.5離心機(jī)：4000r/min1.3.6針頭過濾器：備孔徑為0.45nm微孔濾膜1.4分析方法1.4.1提取精確至0.00lg加入提取液（4.550mL旋渦振蕩器混勻，稱取5g試樣。超聲水浴中提取15min中間取出搖動1次,然后4000r/min離心5min靜置,取上清液過0.45um濾膜，供液相色譜測定。142規(guī)范曲線的制備用水或流動相稀釋成濃度分別為0.100.501.002.0010.0Ug/mL堿胺唾惡喊標(biāo)準(zhǔn)溶液，準(zhǔn)確吸収貯藏液適量。做出

5、規(guī)范曲線。143測定1.4.3.1色譜條件色譜柱：C18柱柱長150mm柱內(nèi)徑4.6mm粒度5um或性能相當(dāng)者"。并超聲脫氣。流動相：磷酸鹽溶液75mL+rp醇25mL用前過0.45um濾膜。流速：ImL/min檢測波長：240nm進(jìn)樣最：1020UL1.4.3.2定性與定量定屋由規(guī)范躺線或單點校準(zhǔn)。根據(jù)規(guī)范品的保管時間定性。144結(jié)果的計算每千克試樣中含堿胺嗤惡I林的質(zhì)雖按下式公式計算：mlx=Dmx每千克試樣屮磺胺嗤惡啦的質(zhì)量（mgml拖尾峰（tailingpeak）。前者少見。＞色譜峰面積對應(yīng)的堿胺嗤惡I林的質(zhì)量（UgD稀釋倍數(shù)；m所稱樣站的質(zhì)量（g保管至小數(shù)點后1位。平行

6、測定結(jié)果用算術(shù)平均值表示。2.結(jié)果與討論2」色譜條件的確定而磺胺嗓惡咻在該體系下出峰時間是56min影響檢測效率。改用磷酸鹽/甲醇體系做流動和。大多數(shù)橫胺類藥物常以磷酸/乙席體系做為流動相。磺胺嚨惡嚇的保管時間發(fā)生了變化。通過改變磷酸鹽和甲醇的比例。磷酸鹽：甲醇磺胺嚨惡啦保留時間min70:304.8675:257.8080:2012.32出峰晚影響檢測效率，出峰早堿胺嗤惡I林與雜質(zhì)峰相互干擾。峰形變寬。磷酸鹽與屮醇比例75:25較為合適。2.2方法線性與最小檢出限對5.010.020.0100.0mg/kg添加濃度按上述方法測定。添加濃度（mg/kg5.010.020.0100

7、.0基線構(gòu)成Zifl

8、積稱峰面積。A=XoXh=2.507Oh=1.064Wh/2h＞峰面積3590671684122536771414線性方程為：y=7821.813601.6相關(guān)系數(shù)為：=0.9992方法最小檢出濃度為5.0mg/kg磺胺嗓惡啦的使用劑量雞配合飼料是60g/t能夠檢出低于用量10倍濃度己能滿足檢測需要。2.3方法的準(zhǔn)確度與精密度每個濃度做5個平行，根據(jù)堿胺唾惡I林在配合飼料中允許使用量為60mg/kg取配合飼料分別制成560100mg/kg磺胺瞳惡I林添加試樣