常用抗凝劑及其配 置法

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1、常用抗凝劑的配制及用法在醫(yī)學(xué)實驗中常需動物的全身抗凝，采出的全血或血漿有的也需加入適當(dāng)?shù)目鼓齽┛鼓鼓齽┑囊笫牵河昧可?、溶解度大、不帶進干擾實驗的雜質(zhì)。一、肝素（1）肝素抗凝作用原理肝素的抗凝作用很強,作死亡復(fù)蘇等實驗時,常用它作動物全身抗凝劑，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，從而使血液不發(fā)生凝固。（2）配制和用量純的肝素10mg能抗凝65~125ml血液(按lmg等于125U，10~20U能抗1ml血液計)。但由于肝素制劑的純度高低以及其保存時間長短不等，因而其

2、抗凝效果也不相同。一般可配成1％肝素生理鹽溶液，用時取0．1毫升于試管內(nèi)，100℃烘干，每管能抗凝5～10ml血液。也可將抽血注射器用配好肝素濕潤一下管壁，直接抽血至注射器內(nèi)而使血液不凝。在動物實驗作全身抗凝時，一般劑量為：大白鼠2．5～3．0mg/200～300g體質(zhì)量，兔10mg／kg體質(zhì)量，狗5～10mg／kg體質(zhì)量。肝素可改變蛋白質(zhì)等電點，因此當(dāng)用鹽析法分離蛋白質(zhì)作蛋白質(zhì)各部分的測定時，不可采用肝素。市售的肝素鈉溶液每毫升含肝素12500U，相當(dāng)于100mg。（3）注意事項做全血DNA提取的時候抗凝劑不能采用

3、肝素！因為肝素是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的抑制劑！二、草酸鹽合劑（1）原理草酸胺能使血細胞略為膨大，而草酸鉀能使血細胞微縮小，因此草酸銨與草酸鉀按3：2比例配置，可使血細胞體積保持不變；加福爾馬林則能防止微生物在血中繁殖。此抗凝劑最適于作紅細胞比積測定。（2）配制方法及用量草酸銨1．2g、草酸鉀0．8g、福爾馬林1．0ml、蒸餾水加至100ml每毫升血加草酸鹽合劑0．1ml(即相當(dāng)草酸銨1．2mg，草酸鉀0．8mg)。根據(jù)取血量將計算好的草酸鹽劑量加入玻璃容器內(nèi)烤干備用。如取0．5ml于試管，烘干后每管可使5ml血不凝固。（3

4、）注意事項草酸的作用在于能夠沉淀血凝過程中所必需的鈣離子，而達到抗凝目的。用時注意加的量應(yīng)適中，不能過多，以免妨礙去蛋白質(zhì)血濾液的制取。不適用于血液內(nèi)鈣或鉀的測定，也不能用于血液非蛋白氮測定。三、枸櫞酸鈉常配成3～5%水溶液。也可直接加粉劑，每毫升血加3～5mg，即可達到抗凝目的。枸櫞酸鈉可使鈣失去活性，防止凝血。但其抗凝作用較差，堿性較強，不宜作化學(xué)檢驗之用。僅可用于紅細胞沉降速度測定。急性血壓測定實驗所用枸櫞酸鈉為5～6％溶液。四、草酸鉀（一）原理和注意事項草酸鉀為最常用的抗凝劑。其與血液混合后可迅速與血液中的鈣

5、離子結(jié)合，形成不溶解的草酸鈣，使血液不凝固。常用于非蛋白氮測定，但不適用于測定鉀和鈣。草酸鹽能抑制乳酸脫氫酶、酸性磷酸酶和淀粉酶的活性，故應(yīng)注意。（二）配制及使用方法取草酸鉀10g，加蒸餾水少許使溶解，再加蒸餾水至100ml。配制成10％水溶液，如每管加0.1ml則可使5~10ml血不凝。一般如作微量檢驗，用血量較少，可配制成2％溶液，如每管加0．1ml可使1~2ml血液不凝。五、乙二胺四乙酸二鈉鹽（EDTA）EDTA對血液中鈣離子有很大的親和力，能與鈣離子絡(luò)合而使血液抗凝。每0.8mg可抗凝1ml血液。除不能用于血

6、漿中鈣、鈉及含氮物質(zhì)之測定外，適用于多種抗凝。六、（酸性）檸檬酸葡萄糖溶液B（ACD）（用于新鮮抽提或者是凍存的血樣品，實驗室常用）檸檬酸鈉：1.32%（M/V）檸檬酸：0.48%（M/V）葡萄糖：1.47%（M/V）ACD抗凝劑為：檸檬酸0.48g、檸檬酸鈉1.32g、葡萄糖1.47g，加水至100ml，滅菌后備用一般20ML新鮮血液中加入3.5MLACD抗凝劑。比例依次類推！！血液可以在0度條件下保存數(shù)天，或者是零下70度條件下無限期保存！從全血中制備基因組DNA，ACD做為抗凝劑要優(yōu)于EDTA，因為他更加能保存

7、高分子質(zhì)量的DNA，然而，血樣常常被收集于用定量EDTA作為抗凝劑的小管中。在大多數(shù)美國的醫(yī)院中，收集血樣的小管均用顏色標(biāo)明是否含有抗凝劑，紫色頂管蓋的小管一般含有抗凝劑，通常是EDTA的干粉。黃色頂蓋的小管不含抗凝劑。在分子克隆實驗中，前者一般用于收集血樣用于制備基因組的DNA，后者用于收集血樣作為用EB病毒的永生化淋巴細胞的來源。這些永生化的細胞可以作為可更新的來源來制備大量的DNA以備后用，如進行遺傳學(xué)的研究等等！