麻疹病毒檢測方法探究進(jìn)展

《麻疹病毒檢測方法探究進(jìn)展》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、麻疹病毒檢測方法探究進(jìn)展【中圖分類號】R511.1【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1672-3783（2012）06-0465-01【摘要】麻疹病毒（MV）是一種導(dǎo)致全球性傳染病、給人類健康帶來極大危害的病原體。MV的實(shí)驗(yàn)室檢測對麻疹的監(jiān)測、預(yù)防、判斷預(yù)后及采取恰當(dāng)?shù)奶幚泶胧?，均具有非常重要的流行病學(xué)意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。而麻疹病毒實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)的發(fā)展對檢測方法的改進(jìn)和完善同樣具有重要意義。【關(guān)鍵詞】麻疹病毒；檢測；進(jìn)展麻疹是由麻疹病毒引起的急性出疹性呼吸道傳染病，是已知的對人類傳染性最強(qiáng)的疾病之一。世界衛(wèi)生組織（WT0）已將麻疹作為消滅脊灰之后又一個(gè)通過免疫手段消除的傳染?。?］。因此，采用快速、

2、特異、敏感的實(shí)驗(yàn)室檢測方法,對于及時(shí)發(fā)現(xiàn)和確診麻疹病人，迅速控制疫情、降低麻疹發(fā)病率具有重要意義，也是實(shí)現(xiàn)消除麻疹目標(biāo)的重要技術(shù)保障［2］。1方法1.1病毒分離雖然目前麻疹病毒的實(shí)驗(yàn)室檢測方法種類很多，但病毒分離仍是不可替代的經(jīng)典方法，多用于病毒的分子流行病學(xué)研究。1.1.1最初B95a細(xì)胞(含EB病毒的絨毛猴B淋巴細(xì)胞)是用于麻疹病毒分離的首選細(xì)胞系。但是細(xì)胞中含有EB病毒對操作者可能造成危害，因此B95a已不再是麻疹病毒分離的首選細(xì)胞。1.1.2Vero/SLAM細(xì)胞是目前WHO推薦麻疹網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室使用的細(xì)胞，Vero/SLAM細(xì)胞分離麻疹病毒與B95a細(xì)胞具有同樣的敏感性［3］。該細(xì)胞的優(yōu)

3、點(diǎn)是不含有感染性病毒，對實(shí)驗(yàn)室人員而言具有安全性。病毒分離法因培養(yǎng)周期長、實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜、受時(shí)間限制、生物影響因素多等原因，已逐漸被一些快速、準(zhǔn)確、簡便的檢測方法所代替。盡管如此，病毒分離法仍是病毒檢測的經(jīng)典方法。因病毒變異快，病毒分離法可以分離出最新流行的病毒變異株，對鑒定新發(fā)傳染病意義重大，還可為疫苗研發(fā)分離毒株。1.2經(jīng)典血清學(xué)方法用于MV檢測的血清學(xué)方法有很多，早期有血凝抑制(HI)試驗(yàn)、中和抗體試驗(yàn)(NT)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CF)等，可同時(shí)用于病毒和病毒抗體的檢測、分離病毒的鑒定等，特別是HI和NT目前仍是MV鑒定和診斷的重要的方法，在檢測和分離鑒定中起重要作用。1.3免疫學(xué)檢測由于酶聯(lián)

4、免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、免疫熒光試驗(yàn)（IFA）、固相放射免疫試驗(yàn)（SPRIA）等方法將免疫學(xué)技術(shù)與酶、熒光等各種標(biāo)記技術(shù)結(jié)合起來，極大地提高了這些方法的敏感性和特異性，同時(shí)又具有操作相對簡單等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于臨床。目前ELISA法是檢測麻疹抗體最常用的檢測方法。WHO麻疹和風(fēng)疹網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室推薦采用ELISA方法檢測急性期麻疹病毒特異性IgM抗體［3］,對麻疹疑似病例進(jìn)行早期血清學(xué)診斷。1.3.1酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）ELISA是目前應(yīng)用最廣泛的病毒抗原抗體檢測技術(shù)，具有敏感、快速、操作簡單的特點(diǎn)。臨床上常用捕獲ELISA法和間接ELISA法檢測麻疹病毒抗體。%1捕獲ELISA法利用

5、包被在固相載體上的抗人IgM（卩鏈）抗體，捕捉血清中IgM,再用麻疹病毒抗體和已知的酶標(biāo)記麻疹病毒抗體去檢測血清中IgM抗體，利用底物使酶顯色［4］。據(jù)孫花榮報(bào)告［5］麻疹病毒IgM在發(fā)病早期具有高度的敏感性和特異性，該法在發(fā)病1-3天陽性率為73.33%,4-21天陽性率為93.87%,故對早期診斷麻疹有著重要意義。%1間接ELISA法將麻疹抗原包被于固相載體上，加入待測血清，再用酶標(biāo)記抗抗體間接檢測出特異性抗體［4］。一般應(yīng)用間接ELISA法測定血清中IgG抗體，用于流行病學(xué)調(diào)查，如人群抗體水平測定和疫苗免疫效果觀察等。邵榮標(biāo)等［6］報(bào)告IgM抗體檢測對麻疹病例診斷漏診率相當(dāng)高，病毒分離培

6、養(yǎng)法漏診率更高，可靠的方法是檢測雙份血清中的IgG抗體。1.3.2免疫熒光實(shí)驗(yàn)（IFA）免疫熒光檢測法是以熒光素標(biāo)記在特異的抗體（或抗原）上，當(dāng)抗原（或抗體）結(jié)合后，在熒光顯微鏡下觀察到其是否存在。分為直接法和間接法。IFA具有簡便快速、特異性高、敏感、能定量等特點(diǎn)，是麻疹網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行MV檢測的重要方法之一。狄軍波［7］比較IFA檢測咽拭子麻疹病毒抗原和血清ELISA法檢測麻疹I(lǐng)gM抗體對兒童麻疹病毒感染的診斷價(jià)值。典型麻疹組IFA、ELISA陽性檢出率分別為96%、58%；不典型麻疹組為100%、59%；IFA的敏感度為97%,特異度為100%oIFA的敏感度要明顯優(yōu)于ELISAO但I(xiàn)FA

7、因參與因素較多，易出現(xiàn)非特異性熒光染色，并且需要使用熒光顯微鏡，不易推廣。1.3.3放射免疫試驗(yàn)（RIA）放射免疫是以放射性同位素作為標(biāo)記物的標(biāo)記免疫測定法，放射免疫試驗(yàn)靈敏度極高，能測出每毫升含ng和Pg的含量水平。但同位素有一定半衰期，檢測需要特殊儀器，且對環(huán)境有一定的污染，一般在基層很難推廣［4］o1.4分子生物學(xué)檢測技術(shù)1.4.1核酸分子雜交用放射性核素（如1251）或非放射性（如生物素一