生命科學(xué)指導(dǎo)

《生命科學(xué)指導(dǎo)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。

1、總結(jié)一：PCR技術(shù)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction)簡(jiǎn)稱PCR技術(shù)，是一種體外擴(kuò)增特異DNA片段的技術(shù)。PCR技術(shù)操作簡(jiǎn)便，可在短時(shí)間獲得數(shù)百萬(wàn)個(gè)特異的目的DNA序列的拷貝。80年代中期PCR技術(shù)的發(fā)明，引起了生物技術(shù)發(fā)展的一次革命，目前已被廣泛應(yīng)用于與分子生物學(xué)相關(guān)的各個(gè)領(lǐng)域。PCR發(fā)展簡(jiǎn)史：1983年春，Mullis發(fā)展出PCR的概念;1983年9月,Mullis用大腸桿菌DNA聚合酶做了第一個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)，只用一個(gè)循環(huán)；1984年11月，用同位素標(biāo)記法看到了10個(gè)循環(huán)后的49bp長(zhǎng)度的第一個(gè)PCR片斷；

2、1985年12月20日,Mullis的同事Saiki在Science上發(fā)了一篇論文，方法中用了PCR技術(shù)，導(dǎo)致Mullis的文章到處被拒；1985年10月25日申請(qǐng)了PCR的專利，1987年7月28日批準(zhǔn)(專利號(hào)4,683,202),這回Mullis是第一發(fā)明人。1986年5Mullis在冷泉港實(shí)驗(yàn)室做專題報(bào)告，全世界從此開始學(xué)習(xí)PCR的方法；1986年6月，Cetus公司純化了第一種高溫菌DNA聚合酶，TaqDNApolymerase,這是86年春天Mullis建議做的；1988年，第一臺(tái)PCR儀問世；1991年，HoffmanLaR

3、oche以3億美元的代價(jià)從Cetus公司獲得全權(quán)開發(fā)權(quán)。DNA的體內(nèi)復(fù)制，首先待擴(kuò)增DNA模板加熱變性解鏈，隨之將反應(yīng)混合物冷卻至某一溫度，這一溫度可使引物與它的靶序列發(fā)生退火，再將溫度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。這種熱變性-復(fù)性-延伸的過程就是一個(gè)PCR循環(huán)，PCR就是在合適條件下的這種循環(huán)的不斷重復(fù)。PCR反應(yīng)體系有模板（DNA或RNA）、引物、TaqDNA聚合酶、lOxPCR緩沖液、1.5?4mMMg2+0.2mMdNTP反應(yīng)流程是預(yù)變性｛變性、退火、延伸、涎伸完全、終止。25~35°C循環(huán)引物是決定PCR反應(yīng)的特

4、異性，取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苛酸鏈做引物，用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增，引物的設(shè)計(jì)：基本原則是最大限度地提高擴(kuò)增效率和特異性，同時(shí)盡可能抑制非特異性擴(kuò)增。升高退火溫度可增加引物與模板結(jié)合的特界性；縮短退火和延伸時(shí)間，可減少錯(cuò)誤引發(fā)及多余的DNA聚合酶分了參與酶促延伸的機(jī)會(huì)；降低引物和酶的濃度也可以減少錯(cuò)誤引發(fā)，尤其是能減少引物二聚體的引發(fā)；改變MQ的濃度可進(jìn)一步提高擴(kuò)增的特異性。標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點(diǎn)法，雙鏈DNA在90?95°C變性,再迅速冷卻至40?

5、60°C退火，然后快速升溫至70?75°C延伸，對(duì)于較短靶基因（長(zhǎng)度100?300bp）可采用二溫度點(diǎn)法，將退火與延伸溫度合二為一，一般采用94°C變性，65°C左右退火與延伸。章末自我感想：PCR技術(shù)的誕生無(wú)疑是生命科學(xué)領(lǐng)域的一大進(jìn)步，為基因工稈、細(xì)胞工程、酶工程等重大工程提供了技術(shù)保障，以其靈敏度高、簡(jiǎn)便快速、對(duì)標(biāo)本的純度要求低，可以對(duì)血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活組織等組織粗提DNA等主要特點(diǎn)為現(xiàn)代生命科學(xué)所實(shí)用?？偨Y(jié)二：癌癥及其治療癌癥的流行病學(xué)研究：口前癌癥已成為嚴(yán)重危害人類生命和健康的常見病、多發(fā)病。全球約40多億人，

6、癌癥患者近3千萬(wàn)，平均每分鐘就有2.5萬(wàn)人死于癌癥，每年約有600萬(wàn)人患癌癥。我國(guó)13億多人口，每年新發(fā)癌癥患者約170萬(wàn)人，每年130-140萬(wàn)人死于癌癥。我國(guó)最常見和危害性嚴(yán)重的腫瘤為肺癌、鼻咽癌、食道癌、胃癌、大腸癌、肝癌、乳腺癌、宮頸癌、白血病及淋巴瘤等。那什么是癌癥呢？腫瘤有良性腫瘤和惡性腫瘤之分，其中惡性腫瘤也被稱為癌癥。是人體某部位的上皮細(xì)胞(內(nèi)胚層和外胚層)不受機(jī)體控制的無(wú)限增殖的惡性腫瘤。癌是指從上皮組織小發(fā)生的惡性腫瘤。其有三個(gè)基本特征：不死性、遷移性和失去接觸抑制。半然，癌細(xì)胞還有許多不同于其他正常細(xì)胞的生理、生化

7、和形態(tài)特征。癌癥病因的外部因素：(1)化學(xué)致病因素：是目前導(dǎo)致腫瘤的主要原因。像是人們所熟知的黃霉毒索，在花生、玉米、高粱、等糧食作物小都有沾染，它具有公認(rèn)的致癌作用。肝癌的發(fā)生和它有關(guān).(2)物理致癌因素：物理致癌因素包括灼熱、機(jī)械性刺激、創(chuàng)傷、紫外錢、放射線等。如：肺結(jié)核患者反復(fù)的胸透檢查。(3)生物致癌因素：對(duì)這類因素研究較多的是病毒。近來(lái)發(fā)現(xiàn)人類的某些腫瘤與病毒的關(guān)系密切，在一些鼻咽癌、宮頸癌、肝癌、白血病等患者的血清中可以發(fā)現(xiàn)有相應(yīng)病毒的抗體。癌癥病因的內(nèi)部因素：(1)免疫功能的影響：免疫系統(tǒng)功能正常時(shí)，能有效地抵抗、消滅外侵

8、的細(xì)菌、病毒等，并能清除外來(lái)的有毒物質(zhì)及機(jī)體內(nèi)的代謝產(chǎn)物。(2)內(nèi)分泌紊亂的影響：內(nèi)分泌紊亂對(duì)某些腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有一定的作用。內(nèi)分泌紊亂與甲狀腺癌、乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌等發(fā)生有關(guān)。(3)遺傳因素的影響：